继代培养期不同培养基对铁皮石斛茎芽生长的影响
摘要：传统医学有记载为性味功效：味甘，性微寒。生津养胃；滋阴清热；润肺益肾；明目强腰。国际药用植物界称其为“药界大熊猫”；被民间称作“救命仙草”[1]。今年来应人们长期挖掘以及其他生长环境因素，铁皮石斛的生长发育受到了严重影响，资源逐渐枯竭，因此，本文重点研究继代培养期中使用不同培养基对于铁皮石斛茎芽生长的影响，以此提高铁皮石斛的移栽成活率。
关键词：继代培养期；铁皮石斛；培养基
铁皮石斛为兰科石斛兰属多年生草本植物，具有益胃生津、滋阴清热的功能。石斛属实兰科中最大属之一。铁皮石斛一般生长在海拔100—3000米的高度之间。多见附着于树上或岩石之上，生长环境多为温暖、潮湿、和半阴暗环境，不耐寒。铁皮石斛对生长的自然环境要求极为苛刻，而且自然繁殖能力低、生长缓慢。在目前，已严令禁止采摘。
一、实验材料与实验方法
（一）材料
铁皮石斛种子播于无菌玻璃瓶后，通过组织培养诱导产生原球茎。在超净工作台上取出瓶内幼苗，切除根系，取2/3 以上茎芽作为试验材料。在基本培养基中加入白糖 3.5％，琼脂粉 0.85％，pH 值为 5.8～6.0，附加 6-BA（6-苄基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）的培养基。试验共设4个处理，分别为：MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L6-BA（A），N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（B），1/2MS+0.1mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（C），以MS为对照（CK），不添加任何激素。每个处理50瓶，重复3次以上。
（二） 方法
培养基置于培养室进行光照培养，每天光照 12 h，光照强度 1 800～2 000 lx，温度（25±2） ℃，培养 2 个月后观察记录铁皮石斛茎芽增殖结果及生长情况。将无菌瓶苗生长正常的茎芽切下，转入继代增殖培养基，每次培养 60 d，重复 3次，共培养180d。
（三）培养基选择马铃薯-蔗糖-琼脂培养基
20%马铃薯煮汁 1000ml 蔗糖20g 琼脂18g把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200g，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000ml，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000 ml 磷酸二氢钾3g 硫酸镁1.5g 葡萄糖20g 维生素10mg 琼脂18g先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
二、实验结果分析
（一）实验结果
四种处理的实验结果非别为：MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培养基中茎芽生长活力不足，叶片轻度黄化，以及生长缓慢。N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基中茎芽生长活力极差，叶片严重黄化，生长迟缓，1/2MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培养基中茎芽增殖6.5倍，平均芽长3.5cm，叶片生长迅速，茎芽健康。
（二）结果分析
培养基的不同配比，对于铁皮石斛茎芽的增殖倍数以及生长速度有不同的影响，因培养基配比浓度不同，所以对于原球茎的增殖作用也不同，在低浓度下，原球茎的增殖速度和ABA浓度有关。添加物和碳源也是影响增殖的重要因素。培养基中加入适当活性炭能有效增加和促进原球茎的分化，利于生长。
铁皮石斛要完整的生长要经过诱导、增殖、分化、培育等时期，生长因素和生长环境要求也十分重要，因此，有效的培养基培养结果就成为栽种前的重要依据，本文研究结果显示四种处理的实验结果非别为：MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培养基中茎芽生长活力不足，叶片轻度黄化，以及生长缓慢。N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基中茎芽生长活力极差，叶片严重黄化，生长迟缓，1/2MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培养基中茎芽增殖6.5倍，平均芽长3.5cm，叶片生长迅速，茎芽健康。对比可得，选择 1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA 培养基进行继代培养，达到组培工厂化育苗水平，更有可能培养合格商品苗。组培苗根长在0．5-1．0cm时是移植的最佳时期。栽培前，将铁皮石斛组培苗放在室内炼苗20～25天后，用清水洗净组培苗根上的培养基，用0．1%的百菌清液消毒，以防组培苗根腐烂。栽培时，按15 cm×20 cm的株行距种植，种植时使根系自然舒展，将基质覆盖住根为宜，轻轻提苗，使苗根系能与基质充分接触，浇足定根水。
结束语
铁皮石斛为丛生植物，多株种植比单株种植长势更好，以3株1丛种植更适宜。栽培时间以3～6月为宜，其间栽培组培苗成活率较高，可达95%以上，且生长健壮。现关于铁皮石斛组织培养所采用的方法和材料能有效的增加石斛的生长增殖，在研究过程中，组培苗的繁殖系数能达10倍以上，但是增殖10代后原球茎芽胚性消失，因此，在产中还需有效的观察和研究。
参考文献
[1]周江明.不同有机物对铁皮石斛试管苗生长发育的影响[J].中国农学通报,2005,(8)
[2]邵华,张玲琪,李俊梅,等.铁皮石斛研究进展[J].中草药,2004(1)
[3]陈瑞蕊，林先贵，施亚琴.药用石斛及其组培技术研究概要[J].江苏农业科学，2002（5）：
作者简介：吴晓荣（1971- ），女，四川安岳人，实验师，从事农学类综合实验工作。
