正交实验法优选咽炎胶囊生产工艺
正交实验法优选咽炎胶囊生产工艺
【摘要】 目的优选咽炎胶囊的提取、精制工艺。方法考察100℃水煎煮时间、加水量、煎煮次数3因素3水平对提取工艺的研究；考察提取液密度、醇沉浓度2因素3水平对精制工艺的影响。以黄芩苷为考察指标，用薄层色谱法进行测定。结果根据黄芩苷的含量测定结果，确定最佳提取、精制工艺。结论加6倍量水提取2次，1h/次，提取液浓缩到相对密度1.20，用70%的乙醇沉淀，提取率高，稳定性好。
【关键词】 正交实验 黄芩 薄层扫描
咽炎胶囊是江门市中心医院生产的医院制剂，由黄芩、金银花、玄参等中药组成，具有清热解毒、利咽消肿、滋阴疏表之功，用于治疗急、慢性咽炎。为了筛选最佳提取、精制条件，通过正交实验，对提取时间，加水量，提取次数进行3水平考察，精制时对浓缩液的密度、乙醇沉淀时的浓度进行2水平考察。以方中君药黄芩中的黄芩苷为考察指标，采用薄层扫描法进行含量测定，结果稳定可靠，确定了提取和精制工艺。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
日本岛津CS-930型双波长薄层扫描仪。
1.2 试剂
黄芩苷（中国药品生物制品检定所），硅胶G（青岛海洋化工集团），D101型大孔树脂（天津制胶厂），药材购自汤东药材公司，经鉴定符合《中国药典》2005版要求。其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 对照品溶液的制备及薄层扫描条件的选择精密称取黄芩苷对照品10.70 mg于25ml量瓶中，加甲醇稀释到刻度得浓度为0.428 mg/ml的对照品溶液。吸取对照品溶液2 μl，点于含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂［1］，预平衡30 min后展开，取出晾干，对其斑点于200～370 nm波长范围内反射法锯齿扫描，结果在275 nm处有最大吸收波长，在370 nm处无吸收。故选择波长λs=275 nm, λR=370 nm，狭缝1.25 mm×1.25 mm，线性参数Sx=3［2，3］。
2.1.2 标准曲线制备分别取黄芩苷对照溶液（0.428mg/ml）1，2，3，4，5 μl点于同一硅胶G薄层板（20 cm×20 cm）上，展开，取出晾干，扫描测定峰面积。结果在0.428～2.14 μg间黄芩苷与峰面积呈线性关系，回归方程为Y=12 308X-72，回归系数为0.999 4。
2.1.3 样品测定称取干浸膏0.2 g，精密称定，加入预处理好的大孔树脂柱中，先用50 ml的蒸馏水洗脱，再用100 ml的甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液并回收甲醇，然后用甲醇定容到25 ml，取3 μl按“标准曲线制备”项下的方法进行测定。
2.2 正交实验设计与结果
2.2.1 提取工艺正交实验设计及结果分析按处方量，取符合药典规定的干燥饮片。加溶媒量A：最少加溶媒量为浸过药材药面的量。提取次数B：按分配原理，取1，2，3次3个水平。提取时间C：依经验，取1，1.5，2 h 3个水平。
最低加溶媒量确定：取上述药材提取1 h，调整溶媒量使溶媒浸过药面时称重，加入溶媒量为420 g，则最少加溶媒量为药材的3.6倍，取整数为4倍量。实验因素与水平表见表1。表1 咽炎胶囊提取正交实验因素与水平。
取处方量药材116 g（黄芩中黄芩苷含量10%），按表进行提取，提取液滤过，合并滤液，减压干燥，称取膏重，薄层色谱法测定干膏中黄芩苷含量，实验与计算结果见表2～3。表2 L27（313）咽炎胶囊提取正交实验计算表
实验1加水量/倍2提取次数34567提取时间t/h黄芩苷含量（略）表3 咽炎胶囊方差分析（略）
结果：因素A、B有非常显著性差异，因素C无差异。
结论：A2﹥A3﹥A1，取A2，B2﹥B3﹥B1，取B2，C取C1，即A2B2C1，加6倍量水提取两次，1 h/次。
2.2.2 精制工艺正交实验设计及结果分析增加精制工艺主要是因为：通过精制可以使鞣质等物质沉淀除去，有利于浸膏的干燥，缩短干燥时间，同时也减少服药量。
影响乙醇沉淀作用的因素有浓缩液的密度、加入沉淀用乙醇的量。浓缩液的密度，取1.10，1.20，1.30 3个水平。加入乙醇的量B：使含醇量依次取60%，70%，80%3个水平。实验因素与水平表见表4。表4 咽炎胶囊精制实验因素与水平设计（略）
考虑回收乙醇后脂溶性成分析出，加醇沉淀时未及时溶解而被沉淀包埋、吸附损失，所以加乙醇时边搅拌边加入。
取处方量药材共116 g，（其中黄芩中黄芩苷含量10%），加6倍量水提取两次，1 h/次，合并滤液，减压浓缩，测定相对密度，按表5进行实验，放置24 h，滤取上清液，上清液减压回收乙醇，取出，蒸干溶媒，减压干燥，称取膏重，薄层色谱法测黄芩苷含量，实验与计算结果见表5～6。表5 C9 34咽炎胶囊精制实验计算（略）表6 咽炎胶囊精制实验方差分析（略）
结果：因素A，B有显著性差异。A2﹥A1﹥A3，取A2，B2﹥B3﹥B1，B取B2。即A2B2。
结论：取相对密度为1.20的浓缩液，加乙醇至70%，放置24 h，滤取上清液，减压回收乙醇。
2.3 优化条件的重复性实验按筛选的条件进行了3次重复性试验，测得的黄芩苷的含量基本一致，证明该工艺提取率高，稳定性好。
3 讨论
咽炎胶囊的成分复杂，通过萃取分离后，薄层层析效果很差，大孔树脂对黄芪苷有较好的吸附能力（中性条件），故采用大孔树脂吸附柱处理样品，结果薄层层析效果很好。
精制时，浓缩液的密度对黄芩苷的含量影响较大。密度过高，加入乙醇的过程中容易形成小包合物，造成有效成分损失，密度过低，乙醇用量较大，造成浪费。
提取及精制实验结果表明：咽炎胶囊采用水提醇沉法，即用6倍量水提取两次，1 h/次，提取液浓缩到相对密度1.2，加乙醇含量至70%时黄芩苷的含量最高。重复性实验结果显示：该工艺提取率高，稳定性好。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2000：248.
［2］童圭重，毛堡盎，李 洁. 薄层扫描法测定清肺桑芩片中黄芩甙含量［J］. 时珍国医国药，2000，11（4）：305.
［3］谢 玲，赵汝海，张建春.双波长薄层扫描法测定芩柏烧伤液中黄芩苷的含量［J］. 新疆中医药，2005，23（1）： 10 .
