生脉饮与黄芩茎叶提取物对CVB3感染小鼠心肌酶的影响
生脉饮与黄芩茎叶提取物对CVB3感染小鼠心肌酶的影响
【摘要】 目的通过动物感染模型初步探讨黄芩茎叶提取物与生脉饮对柯萨奇病毒(CVB3)所致心肌炎中心肌酶的影响。方法分实验组、感染模型组、正常对照组。用1 000 TCID50/0.1 ml 的CVB3攻击昆明种小鼠，建立病毒性心肌炎的感染模型，实验组用黄芩茎叶提取物、生脉饮灌胃给药，感染模型组给予生理盐水，观察心肌病变及心肌酶的变化。结果实验组小鼠的心肌病变及一般状况好于感染模型组（P﹤0.05），心肌酶比感染模型组低（P﹤0.05）。结论黄芩茎叶提取物与生脉饮能减轻CVB3感染小鼠心肌的损伤，减少心肌酶的产生。
【关键词】 柯萨奇病毒 病毒性心肌炎 黄芩茎叶提取物 生脉饮 心肌酶
Abstract:ObjectiveTo study the effect of Shengmaiyin and extrcat from stems and Leares of Scutellaria Barealeusis on the myocardial enzymes in mice infected CVB3.MethodsKunming mice were divided into experimental group, infectious group and control group. Kunming mice were intraperitoneal challenged with 0.1ml 1 000 TCID50 CVB3 to set up myocarditis infectious model. The myocardial enzymes and myocardial change were observed. ResultsCompared with control group, there was significant difference in myocardial change and myocardial enzymes in drug groups (P﹤0.05).ConclusionShengmaiYin and the flavone of Scutellaria baicalensis can reduce the release of myocardial enzymes, alleviate myocardial cell injuryd of the mice with CVB3-induced myocarditis.
Key words:Coxsackievirus; Viral myocarditis; Scutellaria baicalensis; ShengmaiYin; Myocardial enzymes
病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）, 为常见多发病。肠道病毒中的柯萨奇病毒B组（coxsackievirus B3，CVB3）是引起病毒性心肌炎的主要病原体。承德医学院中药研究所从黄芩茎叶中提取的黄芩茎叶总黄酮具有抗炎、解热作用，体外实验表明黄芩茎叶总黄酮具有一定的抗病毒作用。生脉饮临床常用于心血管系统疾病的治疗。本研究利用柯萨奇病毒感染动物模型，通过观察不同药物对病毒性心肌炎小鼠心肌酶的影响，了解黄芩茎叶提取物与生脉饮对病毒性心肌炎的治疗效果。
1 材料与方法
1.1 细胞株、病毒株、动物人宫颈癌细胞系(Hela)细胞；柯萨奇病毒B组3型（CVB3）（Nancy株）；昆明种小鼠，4～5周龄，雌雄兼用，购自山西医科大学实验动物中心，合格证号:医动字第070102号。
1.2 药物
生脉饮煎剂(浓度为1g/ml)，配方为红参∶五味子∶麦冬＝5∶5∶3。黄芩茎叶提取物，承德医学院中药研究所提供。
1.3 动物模型的制备黄芩茎叶提取物用5%的甲基纤维素制成混悬液，小鼠给药剂量为：黄芩茎叶提取物200 mg/kg，生脉饮煎剂(1 g/ml)20 g/kg，微量法测定CVB3的TCID50为10～6.5/0.1 ml。CVB3感染量为1 000 TCID50/0.1 ml。出生4～5周的昆明种小鼠，雌雄各半。分层随机分组，每组30只：包括实验药物组、感染模型组、正常对照组。实验组和感染模型组小鼠腹部常规消毒后，注射1 000 TCID50/0.1ml的CVB3 0.1 ml，1 h后实验组灌胃给药，0.2 ml/10 g,2次/d。正常对照组、感染模型组给予相同剂量的生理盐水灌胃。每日测体重、随机抽取部分小鼠测体温，观察小鼠的一般状况，各组动物均给予正常饮食、饮水。连续给药10 d，记录各组小鼠的一般情况，给药第7天，每组随机取5只小鼠摘眼球取血，避免溶血，用Eppendoef管2 000 r/min离心15 min，收集血清，用AU640全自动生化分析仪测定心肌酶（AST，CK，CK-MB，LDH，HBDH）。小鼠摘取心脏，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片（5 μm），HE染色，用光镜观察心肌病理变化，采用Rezkalla法计算心肌病理记分，即每张切片随机取5个视野，计算每个视野中炎性细胞浸润及坏死区域面积与整个视野的面积之比：无病变为0分，﹤25%为1分，25%～50%为2分，50%～75%为3分，﹥75%为4分。
1.4 统计学处理用SPSS 11.0软件对病理积分、心肌酶进行方差分析，组间比较采用q检验，P﹤0.05为差别有统计学意义。
2 结果
2.1 各组小鼠实验前测量体重、体温经方差分析各组之间均无统计学差异（P﹥0.05）。
2.2 小鼠一般情况及心肌病理变化
病毒对照组小鼠于接种CVB3后第3天开始出现活动减少，行动迟缓、精神萎靡、毛蜷缩，进食量减少，个别小鼠体温低于32℃。第4天开始死亡。死亡多集中于第7～14天。实验组小鼠一般情况好于病毒对照组，出现死亡时间在第7天以后，小鼠死亡前均出现体温过低（﹤32℃）。实验组小鼠死亡时间明显较病毒对照组推迟。各组均出现不同程度的心肌病理改变，心肌病变记分见表1。表1 病理积分(略)
2.3 各组小鼠心肌酶量给药后第7天小鼠经摘眼球取血，测定谷草转氨酶（AST）、肌酸肌酶（CK）、肌酸肌酶MB同功酶（CK-MB）、α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）、乳酸脱氢酶(LDH)。病毒对照组小鼠血清各种心肌酶均高于正常对照组和治疗组（P﹤0.05），黄芩与生脉饮组之间无明显差异（P﹥0.05）但与两者合用组有统计学差异。结果见表2所示。表2 感染后7 d小鼠心肌酶含量(略)
3 讨论
病毒性心肌炎最常见的病原体为柯萨奇病毒 B组，病毒性心肌炎患者的病情临床表现多种多样，不是单用一种药物所能治愈的，目前对病毒性心肌炎尚无特效治疗方法。中药黄芩传统以其地下部分入药，而大量的黄芩茎叶长期废弃不用，造成了极大的资源浪费，承德医学院中药研究所对黄芩茎叶有效成分进行了广泛系统的研究，发现黄芩茎叶提取物总黄酮的主要化学成分为野黄芩苷，具有广泛药理活性，如抗炎、抗病毒、改善心律失常的作用［1，2］ 。生脉饮中的人参具有较强的提高机体内源性超氧化物歧化酶活性和抗氧化作用。临床上生脉饮作为传统复方常用于冠心病、病毒性心肌炎、肺心病、心律失常、心力衰竭等心血管疾病的防治［3，4］ 。
重度感染产生毒素引起心肌损害可致心肌酶升高，因此心肌酶的变化能反映心肌损伤。CK是心肌中重要的能量调节酶, CK-MB是CK同工酶,主要存在于心肌中，分子量小，心肌受损时在血清中出现，持续时间短，是心肌受损的早期诊断指标。LDH是一种非特异性心肌酶，存在于心肌及其他组织细胞的胞浆和线粒体中，不同组织有其特征性同工酶，α-HBDH主要来源于心肌，它在心肌中含量较丰富，当心肌受损时，升高或下降较慢，升高后可持续数天。由于CK-MB、α-HBDH主要来源于心肌，分别是CK、LDH的同工酶，可以认为 CK-MB/CK、α-HBDH/LDH升高到一定范围，可以反映出心肌受损［5，6］。有研究表明在病毒性心肌炎患者中，CKMB/CK多数高于6%,α-HBDH／LDH多数高于0.8,它们与心肌受损的特异性指标cTnI的阳性结果有很好的一致性关联［7］。研究结果显示实验药物组小鼠心肌酶量与病毒对照组比较有统计学意义，说明生脉饮和黄芩茎叶提取物能减少染毒小鼠心肌酶的产生。同时实验药物组小鼠心肌病理计分与病毒对照组有统计学差异，提示生脉饮和黄芩茎叶提取物能减轻心肌细胞的损伤。另有文献表明［8］，病毒损伤心肌后心肌缺血期细胞内游离钙浓度增加，Ca2+可激活催化黄嘌呤脱氢酶转变为黄嘌呤氧化酶途径。氧自由基引起的膜脂质过氧化反应，可使膜对Ca2+的通透性增加，进一步加剧细胞内钙聚集，而黄芩苷具有钙拮抗作用，能抑制Ca2+内流，减轻细胞水肿坏死,减轻心肌病变。同时生脉饮抑制氧自由基的生成，使心肌酶活力明显恢复，并能增强免疫功能，提高小鼠的生存率。因此生脉饮和黄芩茎叶提取物合用后对CVB3感染鼠更具有保护和治疗作用。
【参考文献】
［1］张凤英，宋鸿儒，高玉峰.黄芩茎叶提取物与生脉饮抗柯萨奇病毒B3的体外研究［J］.天津医药，2005,33(11）：716.
［2］佟继铭,刘玉玲,周崇坦,等. 黄芩茎叶总黄酮抗心律失常作用研究［J］.中草药,2002,33(8):731.
［3］许之民,赵美华,陆秋芬，等.生脉散对急性病毒性心肌炎临床症状及炎性损伤指标的影响［J］.中西医结合心脑血管病杂志,2003,1⑵:86.
［4］季宇彬.中药复方化学与药理［M］.北京：人民卫生出版社,2003：300 .
［5］周新,涂植光.临床生物化学和生物化学检验，第3版［M］.北京：人民卫生出版社,2003：292.
［6］张秀明，李健斋，魏明竟，等.现代临床生化检验学［M］.北京：人民军医出版社,2001：187.
［7］陈丽峰,马增煌,关 琴.心肌酶及其比值和肌钙蛋白的测定对儿童病毒性心肌炎诊断价值探讨［J］.实用医技杂志，2006,13(21)：3765.
［8］黑爱莲,徐平湘,孙颂三，等.黄芩甙对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用［J］.首都医科大学学报，1999,20(2)：86.
