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CD146促肝炎-肝癌恶性转化的作用机制，博士学位论文，共69页。
中文摘要
肝癌是世界第三大癌症，也是我国高发和危害极大的肿瘤。尽管肝癌来源于慢性肝炎的恶性转化这一观念已被普遍接受，然而，目前对肝炎-肝癌恶性转化的机制研究虽略有成效，但仍缺乏针对连续病变阶段的动态研究。本研究基于前期发现CD146是非可控性炎症关键节点分子进一步展开，旨在阐明CD146在肝炎-肝癌恶性转化中的作用，探索调控肝炎-肝癌转化的机制，从而为临床治疗提供新的理论依据。
为了探索CD146对肝炎-肝癌转化的作用与机制，我们构建了四种CD146全身或条件性敲除小鼠以及两种肝炎肝癌小鼠模型（即四氯化碳（CCl4）诱导的肝硬化模型和二乙基亚硝胺-四氯化碳（DEN- CCl4）联合诱导的肝癌模型）。在肝硬化模型中，我们发现，CD146全身敲除（CD146KO）并不影响肝硬化的进程；相反，靶向CD146的功能性抗体AA98可明显减轻小鼠肝硬化症状，提示在肝硬化进程中可能存在CD146+ 促炎和抑炎两群细胞，AA98能阻断促炎细胞群的功能或者上调抑炎细胞群功能。在肝癌模型中，CD146KO 小鼠的肝癌发生率明显降低，提示在肝硬化向肝癌转变过程中CD146+ 抑炎细胞群发挥着主要作用。
为进一步明确抑炎细胞群的类型,我们又分别利用三种CD146条件性敲除小鼠构建肝癌模型，包括内皮细胞特异性敲除（CD146 EC-KO）、T细胞特异性敲除（CD146 T-KO）及巨噬细胞特异性敲除（CD146 M-KO），结果发现肝癌发生率均无明显变化，提示在肝癌发生过程中可能存在其它促癌性CD146+ 细胞群。随后，通过流式细胞术发现，肝癌小鼠中存在髓样来源抑制性细胞（MDSC）的两种亚型，即CD146+ MDSC与CD146-MDSC。更有意义的是，我们发现随着肝硬化进展，CD146+MDSC比例上调，而在经过CD146抗体治疗后比例明显下调，提示CD146+ MDSC是促进肝硬化进展的促炎细胞群。这一上调现象在小鼠肝癌模型中同样得到验证，提示CD146+MDSC是促进肿瘤发生的抑炎细胞群。综上所述，CD146+ MDSC与肝硬化及肝癌的发生呈正相关：即在肝炎中促炎、在肝癌中抑炎，提示CD146+MDSC是炎-癌转化的关键节点，MDSC通过CD146动态调控其功能促进肝炎-肝癌恶性转化，CD146可作为肝炎-肝癌恶性转化的治疗新靶点。
关键词：肝炎；肝硬化；肝癌；CD146；CD146+MDSC

目录
第1章 引言 1
11 肝硬化与肝癌概述 1
111 肝癌病因与流行病学 1
112 肝硬化发生的免疫学基础 2
113 肝硬化的治疗现状 5
114 肝癌发生的免疫学基础 7
115 肝癌的治疗现状 9
12髓样来源的抑制性细胞 10
121 MDSC的来源与趋化 10
122 MDSC的免疫抑制功能 11
123 MDSC与肝脏疾病密切相关 14
13 CD146与免疫系统 15
131 CD146概述 15
132 CD146与免疫密切相关 16
133 CD146与肝脏疾病 18
14研究目标与内容 19
第2章 实验材料与方法 21
21 实验材料 21
211 实验动物与细胞系21
212主要试剂 21
213主要仪器耗材 22
22主要实验方法 23
221 动物模型诱导 23
222 小鼠肝脏组织H&E染色和Masson’s 染色 23
223石蜡包埋的小鼠肝脏组织免疫组化24
224 石蜡包埋的小鼠肝脏组织免疫荧光24
225 小鼠血清AST/ALT检测 25
226 小鼠肝脏淋巴细胞分离 25
227 小鼠肝脏、外周血、脾脏、骨髓流式检测 26
228 血清细胞因子检测 26
229 统计分析 26
第3章 实验结果与分析 27
31 CD146在肝炎肝硬化进程中的表达规律 27
32 抗CD146抗体AA98干预可明显减轻小鼠肝硬化程度 29
33 CD146+MDSC促进肝硬化进程 31
34 CD146全身敲除抑制小鼠肝癌发生 37
35 CD146+MDSC促进肝癌发生 39
第4章 结论与讨论 43
参考文献 45
附录 55
附录1 主要缩略词表 55
作者简历 57