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miRNA-329调控血管内皮受体CD146的分子机制及其功能，博士学位论文，共78页。
摘 要
我们实验室的前期研究发现细胞粘附分子CD146 是新生血管的标志分子（Blood 2003），随后又发现CD146 是血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）的共受体，在血管生成中发挥重要作用（Blood 2012）。然而，CD146 的表达调控机制及其分子功能还不是很清楚。
本文是在上述工作的基础上，研究了血管内皮CD146 的表达调控及其如何促进血管新生的分子机理。我们以氧诱导的视网膜病变（oxygen-inducedretinopathy，OIR）作为研究血管生成的疾病模型，结合生物信息学、细胞及分子生物学等多种实验方法，深入探讨了miRNA 对CD146 的表达及其介导血管生成的调控作用。
本文主要有以下三点重要发现：（1）发现CD146 在OIR 小鼠视网膜的血管内皮细胞上过度表达，并促进OIR 疾病的发生发展。无论是CD146 血管内皮特异性敲除，还是CD146 抗体均能显著抑制视网膜血管新生、迂曲和渗漏，提示CD146 可能作为新生血管性眼部疾病的标志物。（2）发现血管内皮CD146 的表达受一个新的血管生成相关miRNA（miR-329）的转录后调控，揭示了miR-329通过直接靶向CD146 的3’端非编码区而抑制其表达，在CD146/VEGFR-2 促进血管新生的过程中起着非常重要的调节作用。在VEGF 和TNF-等促血管生成因子的刺激下，血管内皮细胞中NF-B 信号通路的活化抑制了miR-329 的表达，从而解除了miR-329 对CD146 表达的抑制作用，使CD146 的表达上调。CD146作为VEGFR-2 的共受体，它的上调又进一步促进了VEGF诱导的SKF/p38/NF-B信号通路，并激活了IL-8、ICAM-1、VEGF、MMP-9 等下游促血管生成基因的表达，进而促进血管生成。（3）发现miR-329 不仅是调节CD146 的关键因子，而且有可能成为一种新的治疗试剂，用于眼底血管性疾病的治疗。动物实验表明，在OIR 小鼠的玻璃体腔内注射miR-329，能够抑制血管内皮CD146 的过度表达并显著减轻了视网膜血管新生及疾病的严重程度。
上述研究结果，不仅揭示了CD146 在血管生成中的表达调控机制，而且还为靶向CD146 治疗眼底血管新生等血管相关性疾病提供了新的思路和方法，为多靶点联合治疗提供了理论依据。
关键词：CD146，microRNA-329，抗体AA98，血管生成，新生血管性视网膜病变

目 录
致 谢 I
摘 要 II
ABSTRACT III
目 录V
文献综述 1
1 CD146 1
11 CD146 的结构 1
12 CD146 的表达与调控 1
121 CD146 在正常组织中的表达与调控 2
122 CD146 在肿瘤组织中的表达与调控 2
13 CD146 在血管生成中的作用 4
14 CD146 介导的信号通路 5
2 microRNA 与血管生成 7
21 miRNA 介绍 7
22 miRNA 在血管生成中的作用 10
221 miRNA 在血管发育中的功能 11
222 miRNA 与血管相关性疾病 11
223 miRNA 基因治疗 13
研究内容 15
概述 15
1 材料与方法 16
11 实验材料 16
12 实验方法 17
2 实验结果 23
21 CD146 在OIR 小鼠的视网膜血管中上调表达 23
22 CD146 内皮敲除能减轻OIR 疾病的严重程度 24
23 抗体靶向CD146 可以预防及治疗OIR 疾病 25
24 血管内皮CD146 的表达受低氧环境的调控 27
25 内皮CD146 的3’UTR 受促血管生成因子的调控 29
26 miR‐329 调控内皮CD146 的表达 30
27 促血管生成因子通过下调miR‐329 促进内皮CD146 的表达 36
28 miR‐329 抑制CD146 介导的下游信号通路的激活 39
29 miR‐329 抑制CD146 介导的内皮细胞血管生成 42
210 miR‐329 基因治疗减轻OIR 小鼠疾病的严重程度 44
3 小结与讨论 47
参考文献 52
作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 69