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硕士论文-谷氨酰胺诱导小鼠热休克蛋白70表达的研究，共53页，27320字
摘 要
谷氨酰胺（Gln）是动物血液中最丰富的游离氨基酸之一，近年来越来越多的研究发现 ，
Gln 除了在维持机体酸碱平衡、调节机体免疫机能以及为组织和细胞的物质和能量代谢提
供原料等方面都具有重要作用外，还可以诱导细胞热休克蛋白 70（Hsp70）的表达。本试
验通过给小鼠注射 Gln 和在胚胎培养液中添加 Gln，运用 RT-PCR 和 Western Blot 方法检测
小鼠肝脏、子宫、卵巢和早期胚胎中 Hsp70 表达的变化，研究体内外 Gln 诱导 Hsp70 表达
的作用。
试验方法：
1．选取 8 w 健康雌性昆明小鼠 32 只随机分成 4 组，Ⅰ组为对照组，尾静脉注射生理
盐水，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别尾静脉注射 Gln 0.15 g·kg-1、0.45 g·kg-1、0.75 g·kg-1，注射后 4
h 处死，取肝脏、子宫和卵巢，采用 RT-PCR 和 Western Blot 法分别检测 Hsp70 mRNA 和
Hsp70 蛋白表达量。
2．小鼠胚胎在 37℃、5％CO2 条件下，在 CZB 培养液中体外培养至四细胞，然后转入
含有葡萄糖的 CZB 培养液中继续培养，转液时进行分组，Ⅰ组为对照组，使用正常葡萄糖
-CZB 培养液培养，Gln 浓度为 1 mmol·L-1，试验 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别使用 Gln 浓度为 2 mmo l·L-1、6
mmol·L-1 和 10 mmol·L-1 的葡萄糖-CZB 培养液培养。注射 hCG 113 h 后计算囊胚发育率，161
h 后计算囊胚孵出率，并且采用 Western Blot 法检测各组中囊胚 Hsp70 蛋白表达量。
试验结果：
1．小鼠注射 Gln 后 4 h，试验组 Hsp70 mRNA 和 Hsp70 蛋白表达量均高于对照组，且
表达量随着 Gln 注射量的增加而增加。Ⅱ组肝脏、子宫和卵巢组织中 Hsp70 mRNA 比对照
组分别增加 31.82%、40.00%、41.18%，Hsp70 蛋白表达量比对照组分别增加 9.49%、5.49%、
4.84%，两者与对照组比较差异不显著（P>0.05）；Ⅲ组肝脏、子宫和卵巢组织中 Hsp70 mRNA
和 Hsp70 蛋白表达量比对照组分别增加 72.73%、95.00%、135.29%和 23.56%、21.10%、
14.30%，都显著高于对照组（ P<0.05）；Ⅳ组肝脏、子宫和卵巢组织中 Hsp70 mRNA 和 Hsp70
蛋白表达量比对照组分别增加 140.91%、160.00%、247.06%和 35.33%、33.94%、33.77%，
其中除肝脏 Hsp70 蛋白表达量显著高于对照组（ P<0.05）外，其余均 极显著高于对照组
（P<0.01）。
2．小鼠注射 hCG 161 h 后，小鼠囊胚孵出率在对照组为 61.88%，试验Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组
分别为 64.22%、73.21%和 76.41%，Ⅱ组与对照组比较差异不显著（P>0.05）， Ⅲ组和Ⅳ组
都显著高于对照组（P<0.05）；对于胚胎 Hsp70 蛋白表达量，Ⅱ组比Ⅰ组增加 0.37%，差异
不显著（P>0.05）， Ⅲ组和Ⅳ组分别比Ⅰ组增加 9.13%和 16.42%，显著高于Ⅰ组（P<0.05），
另外，Ⅳ组比Ⅲ组多 6.68%，差异显著（P<0.05）。
结论：
Gln 能增加小鼠肝脏、子宫、卵巢组织和囊胚中 Hsp70 的表达，且 Gln 对体外培养的
小鼠早期胚胎发育有显著促进作用，含有 6 mmol·L-1 和 10 mmol·L-1Gln 的葡萄糖-CZB 培养
液能显著提高小鼠胚胎孵出囊胚率。
关键词：谷氨酰胺；小鼠；组织；胚胎；Hsp70
目录
中文摘要........... 1
英文摘要........... 3
缩略符号......... Ⅰ
文献综述........... 1
1 前言....1
2 热休克蛋白 70 概述. 1
2.1 热休克蛋白 70 的分类...... 1
2.2 热休克蛋白 70 的生物学特性...... 2
2.3 热休克蛋白 70 表达的基因调控.. 2
2.4 热休克蛋白 70 的生物学功能....... 4
2.5 胚胎中热休克蛋白 70 的表达....... 5
3 谷氨酰胺概述........... 6
3.1 谷氨酰胺的来源与合成.... 6
3.2 谷氨酰胺的结构与生物学功能.... 7
3.3 谷氨酰胺的临床作用........ 7
3.4 谷氨酰胺的抗热应激作用 8
4 谷氨酰胺对热休克蛋白 70 的作用. 8
4.1 国内外的研究进展 8
4.2 谷氨酰胺诱导热休克蛋白表达的机制.. 10
5 展望.. 11
研究内容
试验一 谷氨酰胺诱导小鼠组织 Hsp70 表达的研究..........12
1 试验材料......12
1.1 试验动物.. 12
1.2 试验材料与药品.. 12
1.3 引物设计与合成.. 12
1.4 试验仪器.. 13
2 试验方法......13
2.1 组织样品制备...... 13
2.2 组织蛋白提取液总蛋白质含量的测定（Branford 法）.......... 13
2.3 RT-PCR 法检测组织细胞中 Hsp70 mRNA 的表达....... 13
2.4 Western Blot 法检测组织细胞中 Hsp70 蛋白表达水平.15
3 结果与分析. 17
3.1 Gln 对小鼠肝脏、子宫和卵巢 Hsp70 mRNA 表达的影响.......17
3.2 Gln 对小鼠肝脏、子宫和卵巢 Hsp70 蛋白表达的影响........... 19
4 讨论..20
试验二 谷氨酰胺诱导小鼠胚胎 Hsp70 表达的研究..........23
1 试验材料.......23
1.1 试验动物.. 23
1.2 试剂与仪器.......... 23
2 试验方法......23
2.1 胚胎体外培养及分组...... 23
2.2 胚胎蛋白质样品制备...... 24
2.3 Western Blot 检测胚胎 Hsp70 蛋白表达水平.....24
2.4 胚胎发育率检测.. 24
2.5 统计学处理.......... 24
3 结果与分析. 25
3.1 添加 Gln 后胚胎发育形态.......... 25
3.2 Gln 对小鼠附植前胚胎发育率的影响.... 26
3.3 不同浓度 Gln 对小鼠胚胎 Hsp70 表达量的影响......... 26
4 讨论..27
结论..........29
参考文献......... 30
致谢......36
附录37
攻读硕士学位期间发表的学术论文. 40