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液基细胞学标本制片、染色及诊断技术的质量控制

               作者：漆明，蒋庆军，韦海春，颜元秀，蒋瑜采

【关键词】  细胞学技术 组织细胞学制备技术 质量控制

　　近年来随着对提高宫颈癌筛查质量和扩大筛查人群的关注，细胞学新技术发展迅速，液基细胞学制片技术（ThinPrep TCT）及TBS［1］诊断报告方式的出现使浸润性宫颈癌发病率较过去明显降低，但TCT的假阴性、假阳性诊断仍然客观存在，而搞好质量控制是有效降低TCT假阳性和假阴性的前提。笔者从标本制片、染色及诊断等方面介绍如何搞好TCT的质量控制。

　　1  标本制片

　　1.1  标本采集 

　　标本采集的效果明显地影响诊断的准确性，因此标本采集必须取到足够量的细胞数，并且各类标本中应出现有效细胞成分。涂片内可供诊断的细胞太少或红细胞太多等因素均可造成假阴性结果。标本采集应在直观下进行，应采集到病变部位和宫颈的移行区（鳞柱交界区）细胞，该区是绝大多数宫颈癌起源的部位。学海网(www.xuehai.net)TCT标本取样要保证宫颈刷的尖端部位有一定的压力，宫颈刷的尖端放入宫颈内，两边紧贴颈管的外口，以取得足够的细胞成分。涂片中除鳞状上皮细胞外，必须见到柱状上皮细胞或化生的鳞状上皮细胞。另外，标本采集时，应尽量避免干扰物（如血液、黏液等）混入。取材应避开月经期，取材前24ｈ不上药，不冲洗，不过性生活。分泌物较多的时候可在取材前用棉签轻轻沾去，不可用力擦。

　　1.2 标本制备 

　　TCT制片时细胞标本经程序化处理，使黏液、血细胞和炎性细胞与上皮细胞分离，制片薄且分布均匀。一般取材满意的标本均能制出质量较佳的细胞学涂片，但不同原理TCT制片也各存在某些缺点，如膜式法细胞分布不均，涂片中某些区域细胞缺如；沉淀法细胞多的标本制片细胞层次太多，不同一平面上，细胞数量少的标本同样沉淀时间制片可造成细胞片的数量太少。因此，TCT制片也应根据所用的原理方法认真控制好容易产生制片质量不佳的情况。

　　1.3 标本固定 

　　无论是传统的的巴氏涂片或TCT制片，制片完毕应立即放入固定液内，使细胞形态保存完好，避免涂片完全干燥造成细胞褪变，固定不佳会立即引起细胞退化，可导致假阴性或假阳性。TCT的细胞保存液是一种良好的防腐剂，对细胞有一定的固定作用，但仍未达到良好的固定效果，在制成薄层细胞片后，必须用标准浓度的细胞固定液固定。细胞固定液通常采用95%乙醇，乙醇固定液较好的固定浓度为90%～95%，低于90%的乙醇固定效果不好，95%以上浓度乙醇固定可造成细胞核深染。固定时应淹没整张细胞片。固定液还必须保持新鲜，使用过的固定液再使用前应过滤并添加新的固定液，保持其有效浓度。

　　1.4 标本染色 

　　宫颈细胞学的常规染色方法有巴氏染色法和苏木素—伊红染色法等［2］，较理想的染色方法为巴氏染色及其改良染色方法。巴氏染色包括细胞核染色分化→返蓝→细胞质染色→透明等步骤，其中最重要的环节是苏木素的细胞核染色。

　　1.5 染色结果 

　　上皮细胞：核紫蓝色，核仁红色；胞质角化细胞呈粉红色，全角化呈橙黄色，角化前细胞呈淡蓝色或淡绿色；白细胞：核蓝紫色，胞质淡蓝或淡绿色；红细胞鲜红色或橙红色；黏液淡蓝或粉红色。

　　1.6 染色失败的补救 

　　巴氏染色时如遇到染色质量不佳或涂片长期存放而褪色时，可按以下程序处理后重染：①把涂片浸泡在二甲苯溶液内，直到盖玻片自动脱落。②把涂片放入二甲苯溶液内充分浸泡，使树胶完全溶掉。③依次放入无水乙醇和95%乙醇中，各2～5min。④放入蒸馏水中漂洗，直到胞质颜色完全脱落干净为止。⑤放入0.5%盐酸中至显微镜下观察细胞核颜色完全褪掉。⑥水洗10～15min，然后重新染色。

　　2 细胞学诊断

　　2.1 TBS诊断术语及划分界限 

　　TCT诊断要求采用TBS（2001版）报告方式及相关术语，TBS报告系统包括对标本的评估、诊断内容、处理的建议三方面的内容。TBS具体诊断术语包括：正常范围（WNL）、非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）、鳞状上皮内低度病变（LSIL）、鳞状上皮内高度病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）、非典型腺上皮细胞（ＡＧＣ）、宫内膜细胞（AGC）和腺癌（AIS）。

　　2.2 加强制度建设、提高TCT诊断水平和总准确率 

　　总确诊率可反映一个单位团体及其诊断者总的细胞学诊断水平和准确率［3］，定期对假阳性率和假阴性率进行分析和比较，不仅可以较多地发现假阳性或假阴性，而且对于提高细胞诊断医生的水平和发现新问题都有极大的好处。同时，会诊和借片有利于交流和借鉴。建立涂片档案和随访档案，涂片阴性标本至少要保存１年，阳性标本保存5年以上。实验室只接收符合要求的取材标本，要认真查对标本上的病人姓名、床号，查看送检单、检查项目、送检标本是否符合要求，并按序登记编号，记录接收时间。明确复诊制度，至少对有问题的或怀疑有问题的涂片进行复诊，尽可能减少错误率。建立比对、会诊和借片制度，提高细胞学诊断水平和总准确率。不断提高技术素质，加强并逐渐完善细胞形态学检查的质量要求与控制，宫颈细胞学诊断既需要临床检验技术，又需要一定的病理学基础知识，所以必须高度重视和加强对专业人才的培养。科室内应有定向培养和专业提高的计划和制度等，还应多出去看看，探讨交流，也可通过专业网站汲取新知识，不断进取，提高专业水平。

【参考文献】
  　　［1］刘树范.浅析巴氏五级分类法与TBS描述性诊断报告方式［J］.中国实用妇科与产科杂志，2003，19（3）：135-137.

　　［2］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.南京：东南大学出版社，2006：325-326.

　　［3］柏长铭.细针细胞学检查的质量控制［J］.江西医学检验，2004，22（3）：247.