黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究
【摘要】 目的 观察黄连解毒汤对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用及中药的量效关系。 方法 32只SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常组，模型组，黄连解毒汤低剂组，高剂组；除空白组外，其余各组均以1000 mg/kg D-Galn腹腔注射造模，空白组则以等量NS腹腔注射；造模后立即对中药组给予相应浓度中药10ml/kg灌胃，每日一次，余组则以等量NS灌胃。染毒24h后，股动脉取血，测血清ALT,AST,并解剖肝脏，光镜下观察其病理变化，操作同前。 结果 模型组与正常组相比，模型组ALT、AST活性明显增高；治疗组与模型组相比，治疗组转氨酶活性降低，差异有统计学意义（均p＜0.05）；两治疗组间相比，转氨酶活性差异无统计学意义。肝脏病理组织学检查显示，治疗组肝细胞坏死及炎细胞浸润程度均较模型组减轻。 结论 对1000mg/kgD-Galn诱导的大鼠急性肝损伤，黄连解毒汤干预24h后，有一定的治疗作用。
【关键词】 黄连解毒汤 急性肝损伤 D-氨基半乳糖胺 量效关系
黄连解毒汤方出自《肘后备急方》，名见《外台秘要》，由黄芩、黄连、黄柏、栀子四药组成，有清热燥湿、泻火解毒的功效，主治三焦火毒证，尤其对热毒炽盛证型的急性肝炎，有一定的临床效果[1]。有学者已对该复方进行了研究[2]，但为预防性研究，与临床实际应用有一定的差距。本实验重点观察该方对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药物：D-氨基半乳糖（D-galactosanine, D-Galn）由sigma公司提供，批号7499531，黄连解毒汤的四味药材为中药免煎剂型，购自成都中医药大学附属医院中药房，各药物的剂量比遵守《肘后备急方》原方比例，以蒸馏水煮沸冲为不同浓度的中药汤剂，其中低剂量组 (T1组) 浓度为0.49g/ml，高剂量组（T2组）浓度为0.99g/ml。
1.1.2 动物：清洁级SD大鼠32只，体重200±20g，雌雄各半，由四川大学华西动物实验中心提供,饲养于成都中医药大学附属医院病理生理实验动物中心，自然明暗周期，室温21～23℃。
1.1.3 主要试剂：肝功ALT、AST 试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，批号080211，10%福尔马林缓冲液由华西医科大学药理实验室提供。
1.1.4 仪器：KDC-2046低速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），Sartorius ,R180-D电子分析天平，日立7170全自动生化分析仪，Leica DM4000型显微图像分析系统。
1.2 方法
1.2.1 动物分组及给药量
清洁级SD大鼠32只，雌雄各半，适应性喂养3天后，称重编号。随机分为4组，每组8只，即正常组（C组）、肝损伤模型组（M组，1000mg/kgD-Galn）黄连解毒汤低剂量组（T1组，0.49g/ml，临床等效剂量）、黄连解毒汤高剂量组（T2组，0.99g/ml，2倍临床等效剂量）。
1.2.2 操作过程：
试验前一天对大鼠称重，禁食不禁水。实验前D-Galn以无菌NS配制为10%的浓度，根据文献资料[3]及预试验提示，各组（除C组外）以1000mg/kg D-Galn腹腔注射，C组以等量NS腹腔注射；治疗组造模后，立即以中药10ml/kg灌胃，每日1次，M组、C组则以等量NS灌胃，染毒24h后，对所有动物股动脉放血取血，置于-20℃冰箱待检，随后断颈处死，解剖，观察肝脏大体形态后，取肝脏右叶组织块置于10%甲醛溶液中固定。
离心取血清，全自动生化分析仪以连续监测法检测血清ALT,AST，肝脏病理则送四川大学华西医学中心药理实验室常规方法制作HE切片，以Leica显微图像分析系统，以200×的放大率观察。
1.2.3 统计方法
据SPSS13.0统计分析，数据以x-±s表示，采用Dunnett’s检验，α＝0.05。
2 结果
2.1对血清ALT、AST的影响：24h时，两治疗组均有降低血清转氨酶的作用，差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.2肝组织病理学影响
光镜下观察，C组：肝索排列整齐，小叶结构完整，肝细胞无变性坏死。M组：肝索排列欠齐，肝细胞脂肪样变，点状坏死，血窦内充血，小叶内广泛炎性浸润。T1组:肝索排列整齐，肝细胞少量变性，血窦内少量充血，小叶内点灶状炎性浸润。T2组：肝索排列较齐，肝细胞脂肪变性明显，血窦内少量充血，散在炎症浸润，与T1组无明显差别。
3 讨论
急性肝损伤是由多种病因引起并有多种因素参与的复杂过程，也是是所有肝病慢性化的始动因素。急性肝损伤,特别是急性重型肝炎,发病急,进展迅速,现代医学对此尚无特效治疗。中医学认为其发病主要和热毒有关，热毒炽盛，加以湿邪秽浊之气，凝胶成痰，或热毒深入营血而导致诸种症状发生。黄连解毒汤便是清热解毒，清热除湿的代表方[1]。方中选用大苦大寒的黄连为君，清泻心火及中焦之火，臣以黄芩以清上焦之火，佐以黄柏清下焦之火，栀子清三焦之火，导热下行，引邪从小便出。四药合用，苦寒直折，清热解毒，泄浊退黄。
D-Galn是一种间接肝毒剂，主要通过干扰肝细胞内UTP代谢，影响物质代谢而引起肝细胞变性，其诱导的急性肝损伤是公认的研究肝炎发病机制及保肝新药的模型[4,5]。ALT和AST 是为最常见的诊断肝脏疾病的指标。正常时主要见于细胞内，其中， ALT主要分布于肝脏和肾脏，AST主要分布于心脏和肝脏。当各种病因使细胞膜的通透性增高或者细胞被破坏时，转氨酶大量释放入血，使得血液中含量增高[6]，故血清转氨酶水平的高低与肝损伤程度相关。
本实验结果表明，黄连解毒汤对D-Galn多种的大鼠血清ALT,AST的升高有明显降低作用，而且肝组织病理学也显示中药干预组有较好的保肝作用。两治疗组间药效无明显差异，表明黄连解毒汤的效果可能并非简单的线性关系，尚需进一步实验探索其量效关系。
参 考 文 献
[1] 刘学勤.肝胆病诊疗全书[M].北京：中国医药科技出版社，2001:191-192.
[2] 太田好次等.黄连解毒汤对进行性D-GALN肝损害的抑制作用[J].国外医学中医中药学分册，2003，25（6）：352.
[3]黄正明，杨新波.抗肝炎中药现代研究与应用[M].郑州：郑州大学出版社，2006: 318.
[4]王福根，孙静霞.肝损伤动物模型的建立和应用[J].中国药房，2006，17 （9）:702.
[5]齐艳萍，李和平.急性肝损伤动物模型制备的概述[J].甘肃畜牧兽医，2008，38(2):37
[6]韩硬海，李树桐.临床肝脏病学[M].济南：山东科学技术出版社，2004:33.
