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硕士论文-O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及反应原性检测，共54页，28126字
摘 要
1、根据 GenBank 中已发表的 FMDV 毒株 VP1 的基因序列，设计并合成一对能扩增
639bp 基因片段引物，引物两端分别加 BamHⅠ和 NotⅠ酶切位点。用 PCR 的方法扩增得
到 VP1 基因，将其克隆到 pMD18-T Vector 进行序列测定。用分子生物学软件对本试验
测定的 FMDV VP1 基因序列与 GenBank 已公布的 O 型 FMDV VP1 基因序列进行同源性比较，
结果显示扩增到的 VP1 基因序列与 GenBank 已公布的 O 型 FMDV VP1 的基因序列的同源
性较高均在 93%以上，其中与 CHA 株、LAO 株、MOG 株和 RUS 株同源性在 98%以上。对重
组克隆质粒 PTVP1 进行双酶切得到 639bp 的目的片段，将其以正确阅读框架定向插入
pET-32a（+）中，然后转化至 E.coli BL21（DE3），于 30℃以 1mmol/L 的 IPTG 诱导，
发现 VP1 基因得到了高效表达，且表达产物分子量约为 48KD。
2、将高效表达的目的蛋白经超声波裂解，取沉淀和上清分别进行可溶性分析，发
现表达蛋白以包涵体的形式存在。表达的重组蛋白变性、纯化、复性后，经蛋白免疫印
迹（Western-Blot）分析和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测，发现该融合蛋白具
有较好的反应原性，为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定基础。
关键词：口蹄疫病毒；VP1 基因；基因克隆；原核表达；反应原性
目录
中文摘要
英文摘要
缩略符号
前言……
文献综述
1 FMDV 的分类地位及形态特征……
2 FMDV 基因组的结构特征…………
3 FMDV 的结构蛋白及其功能………
4 FMDV 的遗传变异…
5 口蹄疫诊断技术研究
6 口蹄疫疫苗的研制…
试验内容
1 口蹄疫病毒 VP1 基因的克隆及原核表达…………
1.1 材料
1.2 方法
1.3 结果
1.4 讨论
2 表达的口蹄疫病毒 VP1 蛋白反应原性的检测…
2.1 材料
2.2 方法
2.3 结果
2.4 讨论
参考文献
全文总结
附录……
致谢……