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毕业论文-琼脂糖凝胶上曙红DNA负染及其相关机制，共49页，20443字，附任务书、开题报告、文献综述、开题报告等
课题的内容和任务要求
课题内容
研究DNA染料曙红负染检测技术（包括其机制，最佳实验条件，操作步骤，优化实验时间等）；开发出一种安全便捷、成本低廉，真正能替代EB染色的DNA检测技术。
任务要求
琼脂糖凝胶电泳之后，对几块凝胶分别进行EY负染，锌咪唑负染，EB染色；之后用不同的观测方法对不同的染色凝胶进行图像分析，来比较不同染色方法的背景清晰度和对比度；然后对DNA进行提取回收，测回收率；再通过光谱分析对以上方法进行各方面比较；最后优化本实验方法。

摘要：本实验用EY设计了一种灵敏且简单的方法对DNA进行染色显像，该方法可在一张由EY染料沉淀所致的不透明的凝胶上形成一种稳定的水溶性DNA-染料复合物 。在这样的背景下，DNA以透明条带的形式被选择性地显像出来。与EB一样，用这个新的方法可使低至0.5-1ng量的DNA在1小时内显像出来。此外，我们也研究了染料结合机制，可归结为DNA和EY离子复合物是以沟槽形式结合。
关键词：DNA检测；负染；EY；琼脂糖凝胶

目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………5
外文摘要…………………………………………………………………………………6
前言……………………………………………………………………………………7
1．材料……………………………………………………………………………………7
2．方法……………………………………………………………………………………7
2.1 凝胶电泳………………………………………………………………………7
2.2 DNA染色………………………………………………………………………8
2.2.1 EY负染……………………………………………………………………8
2.2.2 锌咪唑负染…………………………………………………………………8
2.2.3 EB染色……………………………………………………………………8
2.3图像分析…………………………………………………………………………8
2.4 DNA提取………………………………………………………………………8
2.5光谱检测…………………………………………………………………………9
2.5.1 紫外吸收光谱……………………………………………………………9
2.5.2 荧光光谱…………………………………………………………………9
3．结果与讨论……………………………………………………………………………9
3.1 优化染色条件………………………………………………………………9
3.2 EY染料与IZ，EB染料的对比………………………………………………10
3.3不同染色方法后DNA的提取回收……………………………………………12
3.4反应机制……………………………………………………………………12
4．结论 …………………………………………………………………………………14
5．参考文献………………………………………………………………………14
致谢…………………………………………………………………………………16

课题关键问题及难点
研究内容：
（1）探索建立DNA和染料相互作用的机制。
（2）充实和完善DNA负染检测机理，并筛选出对DNA具有选择性和亲和性的DNA染料。
（3）利用琼脂糖凝胶电泳技术，进一步优化染色条件，包括染料浓度、溶液极性和酸碱度、操作温度及染色时间等。
（4）对不同的DNA样品进行检测，进一步验证该技术的有效性和便捷性。
（5）同其他常用、经典的染色方法（如EB染色法）比较，以确定该方法的实用性。
（6）进行重复性实验，并测试染料的稳定性，建立质量技术标准。
技术关键
（1）探索DNA与染料结合的原理，筛选出更有效的染料化合物。
（2）对所用试剂进行探究和筛选，提高该染料与DNA的结合力。
三、完成该课题研究已具备的条件（有关的研究工作基础，仪器设备条件，经费情况）
工作条件
蛋白质组学实验室配有完整的基因组学研究设备，具备从事DNA检测研究所要求的染料筛选、合成、分离、染色等设备条件。
拥有超低温冰箱（-80℃以下）、超高速低温离心机（1×106g以上）、GE等电聚焦系统、DALT-SIX电泳仪、全自动切胶仪、透过式成像系统及分析软件、高速冷冻离心机、紫外分光光度计、红外分光光度计、600 MHz核磁共振仪、各种DNA分离纯化设备、流式细胞仪、二氧化碳培养箱、超声波提取器、多功能紫外透射反射分析仪、倒置显微镜、Elga超纯水系统、Bruka液质连用系统等先进设备、酶标仪、荧光仪。
四、研究方案
1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线
（1）紫外/可见吸收光谱与荧光光谱判断染料和DNA的结合方式
（2）对染料库里的染料进一步筛选，挑选出几种和DNA具有高度亲和力的染料分子。
（3）采用聚丙烯凝胶电泳对λDNA/HaeIII标准品和Plasmid pMHP2分析。将等分梯度稀释的不同浓度的标准DNA溶液上样于含有8%聚丙烯酰胺的分离胶的样品槽中，以含有1 mM EDTA, 40 mM Tris-acetate, pH 8.0的缓冲溶液作为分离胶缓冲溶液，通电流（22 mA/胶），分离，即得。
（4）同时采用琼脂糖凝胶对λDNA/HaeIII进行分析。
（6）DNA染色：采用的染色法有本染色法、EB染色法与IZ染色法。
（7）图象分析：分析使用的凝胶图像通过显像系统（EpsonPerfection V700 Photo）和Molecular Imager Gel Doc XR System (BioRad)获得，产生的图像使用Science Lab 2006（FUJIFILM Corporation，Japan）分析软件分析处理。
（8）进行稳定性实验并确定质量技术标准