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毕业论文-重组融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的表达、纯化与鉴定，共45页，20159字，附任务书、开题报告、文献综述、开题报告等
一、课题的内容和任务要求
1. 课题的研究内容
（1）小批量发酵融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154；
（2）优化融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的纯化条件；
（3）对融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154进行Western鉴定。
2. 课题的任务要求
通过表达和优化重组蛋白TAT-HA-aFGF27-154的分离纯化条件，获得高浓度的融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154，为下一步的生物活性检测提供样品。

摘 要：目的：高效表达并纯化穿膜肽（TAT）－非促分裂型重组人酸性成纤维细胞生长因子（aFGF27-154）融合蛋白，为进一步开发基因工程药物提供实验依据。方法：通过IPTG诱导工程菌E.coli BL21(DE3)/pET3c-TAT-HA-aFGF27-154获得可溶性蛋白表达。融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化，获得蛋白纯品。纯化后的蛋白经western blotting印迹反应鉴定。结果：融合蛋白小批量发酵表达后获得菌体26 g，经SDS-PAGE蛋白电泳分析，融合蛋白主要以可溶性表达为主。表达的蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后，得到纯品蛋白1 mg，纯度高于95%。Western blotting印迹反应结果显示，融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154在大肠杆菌BL21(DE3)内成功获得表达。结论：成功表达TAT-HA-aFGF27-154融合蛋白并获得蛋白纯品，为进一步的动物实验提供药物。
关键词：穿膜肽；非促分裂酸性成纤维细胞生长因子；蛋白纯化；免疫印迹

目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………5
外文摘要…………………………………………………………………………………6
引言……………………………………………………………………………………7
1材料……………………………………………………………………………7
1.1菌种……………………………………………………………………………7
1.2试剂………………………………………………………………………………7
1.2.1 蛋白表达纯化试剂…………………………………………………………7
1.2.2 常用溶液配制………………………………………………………………8
1.2.3 蛋白电泳相关溶液 ………………………………………………………8
1.2.4 蛋白纯化相关溶液 ………………………………………………………9
1.2.5 western相关溶液 …………………………………………………………9
1.2.6 主要仪器设备………………………………………………………………9
2.实验步骤 ……………………………………………………………………………10
2.1 融合蛋白的小批量发酵…………………………………………………………10
2.2 融合蛋白的纯化 ………………………………………………………………11
2.3 融合蛋白的鉴定 ………………………………………………………………12
3.实验结果 ……………………………………………………………………………12
3.1 融合蛋白的小批量发酵…………………………………………………………12
3.2 融合蛋白表达形式的确定………………………………………………………12
3.3 融合蛋白的纯化…………………………………………………………………13
3.4 融合蛋白的鉴定…………………………………………………………………13
4．讨论………………………………………………………………………………13
参考文献……………………………………………………………………………15
致谢……………………………………………………………………………………15

二、课题关键问题及难点
1. 课题的关键问题
重组蛋白TAT-HA-aFGF27-154分离纯化条件的摸索。
2. 课题的难点
（1）确定影响TAT-HA-aFGF27-154纯化的因素，包括等电点、溶解度等；
（2）根据融合的特性，选择合适的纯化方法；
（3）确定融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的最佳分离纯化条件。
（4）对纯化得到的融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154进行鉴定。
三、完成该课题研究已具备的条件（有关的研究工作基础，仪器设备条件，经费情况）
本课题的指导教师已从事相关研究多年，并就本课题研究内容获浙江省及温州市项目支助。同时，本实验在浙江省重中之重实验室中开展，实验室具有实验需要使用的所有仪器；本课题经费来源于浙江省自然基金：《TAT-aFGF穿透眼球屏障的作用机理及其治疗眼底疾病的疗效研究》（项目编号：Y2090358）
四、研究方案
1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线
研究方法
发酵及纯化使用的各种溶液的配置
重组蛋白的小批量发酵
菌体的裂解和蛋白提取液的获得
融合蛋白的纯化
融合蛋白SDS-PAGE电泳鉴定
融合蛋白Western鉴定