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毕业论文-重组FGF-21的纯化和活性检测，共53页，21957字，附任务书、开题报告、文献综述、开题报告等
课题的内容和任务要求
课题组在前期已利用基因工程手段，采用大肠杆菌偏好密码子，构建得到可溶性高效表达重组hFGF21蛋白的基因工程菌，本研究在前期基础实现FGF21的纯化过程，并初步检测其活性，为后续的机理研究以及开发治疗糖尿病、肥胖病和肝癌的候选药物奠定基础。

摘要：目的：在前期基础实现hFGF21的纯化过程，并初步检测其活性，为后续的机理研究以及开发治疗糖尿病、肥胖病和肝癌的候选药物奠定基础。方法：利用离子交换柱层析方法实现FGF21的纯化过程，并利用利用Western Blotting 检测了hFGF21蛋白的准确性；GOD-POD法初步检测了hFGF21蛋白调节血糖的生物活性。结论：本论文通过使用2次阴离子交换柱纯化了hFGF21蛋白，使目的蛋白的纯度都达到85%以上，反相层析柱纯化蛋白纯度提高到95%；利用Western Blotting 检测了hFGF21蛋白的准确性；GOD-POD法初步检测了hFGF21蛋白调节血糖的生物活性。
关键词：人成纤维细胞生长因子-21;离子交换层析法;Western Blotting;GOD-POD法

目录
中文摘要…………………………………………………………………………………6
外文摘要…………………………………………………………………………………7
引言……………………………………………………………………………………8
1．仪器与试剂……………………………………………………………………………9
1.1 仪器……………………………………………………………………9
1.2 常用溶液及缓冲液……………………………………………………………10
1.2.1 DNA电泳相关试剂和溶液……………………………………………10
1.2.2 蛋白电泳相关溶液………………………………………………………10
1.2.3 Western相关溶液………………………………………………………12
1.2.4 细胞培养及细胞实验相关溶液……………………………………………12
1.2.5 Lowery法测蛋白浓度相关溶液……………………………………………13
1.3 试剂与耗材………………………………………………………………………13
1.3.1 细胞株………………………………………………………………………13
1.3.2 纯化柱与透析袋……………………………………………………………13
1.3.3酶、抗体、试剂盒……………………………………………………………13
2．实验方法…………………………………………………………………………14
2.1 hFGF21的纯化…………………………………………………………14
2.1.1 菌体破碎………………………………………………………………14
2.1.21次Q Sepharose Fast Flow纯化…………………………………………14
2.1.32次Q Sepharose Fast Flow 纯化…………………………………………14
2.1.4Welch-C18精纯化…………………………………………………………14
2.2 精纯化的hFGF21蛋白用HPLC(C12)检测其纯度……………………………15
2. 3 hFGF21分子量的鉴定（质谱）…………………………………………………15
2. 4 hFGF21蛋白的Western Blotting鉴定…………………………………………15
2.4.1SDS-PAGE电泳……………………………………………………………15
2.4.2 转膜………………………………………………………………………15
2.4.3 封闭………………………………………………………………………16
2.4.4 一抗孵育…………………………………………………………………16
2.4.5二抗孵育…………………………………………………………………16
2.4.6化学发光法进行曝光，拍照………………………………………………16
2.5 hFGF21调节血糖功能的初步研究……………………………………………16
2.5.1 Lowery法测hFGF21蛋白浓度…………………………………………16
2.5.2 鼠源3T3-L1细胞的培养与分化…………………………………………17
3．实验结果…………………………………………………………………………17
3.1 Q Sepharose Fast Flow 纯化结果………………………………………………17
3.2 Welch-C18精纯化结果…………………………………………………………19
3.3纯化的hFGF21纯度的测定………………………………………………………19
3.4目的蛋白hFGF21的分子量测定…………………………………………………20
3.5 Western Blotting鉴定……………………………………………………………20
3.6 hFGF21调节血糖功能的初步研究结果………………………………………20
4．讨论…………………………………………………………………………………22
4.1蛋白纯化与浓缩方法的方法……………………………………………………22
4. 2蛋白质浓度的测定………………………………………………………………23
4 .3 hFGF21生物活性检测…………………………………………………………23
结束语………………………………………………………………………………24
参考文献……………………………………………………………………………24
致谢……………………………………………………………………………………26

二、课题关键问题及难点
1．蛋白质纯化与浓缩的方法；
2．蛋白质浓度测定的方法；
3． hFGF21生物活性检测的方法。
三、完成该课题研究已具备的条件
论文作者的指导老师在生物制品的中试工艺研究、蛋白结构研究、基因工程药物研究等领域取得了令人瞩目的成果，并且为这些研究成果的产业化与许多相关的研究院所、高校及企业建立了广泛密切的合作。
论文作者所在学校的实验室具备从事本项目研究所需的设备条件，拥有基因表达、发酵、蛋白纯化、细胞分离与培养、生物材料制备与检测、植物组织培养、植物分子育种等系统的仪器设备。另外还有Bruker AVANCE 600 MHz超导高分辨核磁共振谱仪、流式细胞仪、PCR仪、发酵装置、高速冷冻离心机、紫外分光光度计、分离纯化设备、二氧化碳培养箱、酶标检测仪、荧光显微镜、高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、紫外透射反射分析、Elga超纯水系统、全自动酶标仪、离心冷冻干燥系统、AKATA快速蛋白纯化系统、倒置荧光显微镜，BIO-RAD电泳仪， 层析设备，高温高压灭菌器， 冷冻干燥仪，固液相分子杂交仪，超低温冰箱(-85)℃，细胞培养室，真空凝胶干燥器，紫外透射仪，日本OLYMPUS显微镜，低温层析柜，实验动物房60m2等价值4000万元的设备。
四、研究方案
1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线
在前期基础研究基础上利用离子交换柱层析方法实现FGF21的纯化过程，并利用利用Western Blotting 检测了hFGF21蛋白的准确性；GOD-POD法初步检测了hFGF21蛋白调节血糖的生物活性。