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硕士论文-花生黑斑病菌生物学特性及致病机制的研究，共68页，37576字
摘 要
花生黑斑病(Cercospora personata Berk.et Curt)是花生生产上一种重要病害，通常可
造成花生减产10~20%，严重时达30%以上。该病在我国常年发生，但由于国内外缺少对
其病原菌生物学特性等方面基础研究，控制方法不得力，致使发病有逐年加重趋势。本
论文采用不同环境条件影响测定分析、凝胶柱层析分离纯化、致病性测定等方法技术对
花生黑斑病菌生物学特性及毒素进行了系统研究，结果表明：
花生黑斑病菌在 10~35℃均可生长，以 28℃为最适；光/暗交替最有利于菌丝生长；
菌丝在 Landers、花生叶煎汁和 V8 培养基上长势较好，菌落直径较大，其次为 PSA、PDA，
在燕麦培养基上长势最差；碳素营养以蔗糖和葡萄糖为最好，在淀粉和缺碳培养基上能
较快的形成直径较大的菌落，但菌落较薄，菌落干重远低于供试的其他碳源；菌丝在有
机氮源(牛肉膏、蛋白胨)培养基上长势显著好于在无机氮源(硝酸钠、硫酸铵、缺氮)培
养基的生长；菌丝在 pH 值 2~12 范围内均可以生长，最适为 pH=6；致死温度是 60℃，
30min。
病菌分生孢子在 15~35℃之间均可萌发，最适温度为 25℃；病菌只有在水滴中孢子
才有较高的萌发率；孢子在 pH3~10 范围内均可以萌发，最适 pH 值为 6；光/暗交替培养，
最有利于孢子的萌发；分生孢子萌发对营养物质没有特殊要求；分生孢子的致死温度为
52℃，10min。
花生黑斑病菌经体外培养可产生致病毒素，病原菌毒素提取和生物活性测定结果表
明:该毒素极性大，易溶于水，难溶于有机溶剂；硫酸铵分级沉淀法适合提取花生黑斑
病菌毒素，硫酸铵浓度80%时提取效果最好；该毒素为大分子化合物，具有较高的热稳
定性；光/暗交替、静置培养有利于毒素的产生，培养20d时产毒量最大。
经凝胶柱层析分离的毒素，在 280nm 吸光值处,检测到两个洗脱峰，一个高峰值和
一个低峰值。生物活性测定表明，高峰值处收集获得溶液物质具有较强的致病性，产生
的病斑与粗提液中的相同，和病菌接种症状有相同之处，低峰值收集获得溶液物质则没
有明显的生物活性。毒素稀释 1、10、50 倍都有致病性，稀释 100 倍时则不能引起明显
症状。毒素致病性与浓度密切相关。
关键词：花生黑斑病菌，生物学特性，毒素，致病性
目 录
中文摘要........ .1
英文摘要..........3
文献综述..........1
1 综述前言......1
2 尾孢菌叶斑病研究进展1
3 花生黑斑病菌研究现状.5
4 植物病原真菌毒素的研究进展......6
研究内容
1 花生黑斑病菌生物学特性的研究15
1.1 材料与方法...............15
1.1.1 实验材料、试剂及仪器..........15
1.1.2 供试培养基及缓冲液的配制..16
1.1.3 供试花生品种和菌株...............16
1.1.4 供试花生种植培养16
1.1.5 环境条件对菌丝生长的影响..16
1.1.5.1 温度对菌丝生长的影响.......16
1.1.5.2 光照对菌丝生长的影响.......16
1.1.5.3 培养基对菌丝生长的影响...17
1.1.5.4 碳源对菌丝生长的影响.......17
1.1.5.5 氮源对菌丝生长的影响.......17
1.1.5.6 酸碱度对菌丝生长的影响...17
1.1.5.7 菌丝致死温度测定...............17
1.1.6 环境条件对病菌分生孢子萌发的影响..17
1.1.6.1 温度对分生孢子萌发的影响.................17
1.1.6.2 不同湿度对孢子萌发的影响.................18
1.1.6.3 酸碱度对分生孢子萌发的影响.............18
1.1.6.4 光照对分生孢子萌发的影响.................18
1.1.6.5 营养物质对病菌分生孢子萌发的影响.18
1.1.6.6 分生孢子致死温度的测定...18
1.2 结果与分析..... .........19
1.2.1 花生黑斑病症状特点..............19
1.2.2 花生黑斑病菌形态特征..... ....19
1.2.3 环境条件对菌丝生长的影响..19
1.2.3.1 温度对菌丝生长的影响.......19
1.2.3.2 光照对菌丝生长的影响.......20
1.2.3.3 不同培养基对菌丝生长的影响.............20
1.2.3.4 碳素营养对菌丝生长的影响.................20
1.2.3.5 氮素营养对菌丝生长的影响.................22
1.2.3.6 酸碱度对菌丝生长的影响...22
1.2.3.7 菌丝致死温度的测定...........23
1.2.4 环境条件对分生孢子萌发的影响..........24
1.2.4.1 温度对分生孢子萌发的影响.................24
1.2.4.2 湿度对分生孢子萌发的影响.................25
1.2.4.3 酸碱度对分生孢子萌发的影响.............26
1.2.4.4 光照对分生孢子萌发的影响.................26
1.2.4.5 营养条件对分生孢子萌发的影响.........27
1.2.4.6 孢子致死温度的测定...........27
1.3 小结.........28
2 花生黑斑病菌致病毒素及其活性测定..........31
2.1 材料和方法...............31
2.1.1 供试花生品种和植株培养......31
2.1.2 供试病菌菌株........31
2.1.3 产毒培养................31
2.1.3.1 培养时间对产毒的影响.......31
2.1.3.2 光照和振荡对产毒的影响...31
2.1.4 毒素极性的测定....32
2.1.5 毒素的提取和纯化32
2.1.5.1 毒素的粗提.........32
2.1.5.2 毒素的纯化.........32
2.1.6 热稳定性实验......33
2.1.7 致病性测定..........33
2.1.7.1 病菌接种方法.....33
2.1.7.2 花生黑斑病菌毒素致病性测定.............33
2.2 结果与分析...............33
2.2.1 环境条件对病菌毒素产生的影响............33
2.2.1.1 培养时间对产毒的影响.......33
2.2.1.2 光照和振荡对产毒的影响...34
2.2.2 病菌毒素的极性、提取和纯化................35
2.2.2.1 毒素的粗提.........35
2.2.2.2 毒素的纯化.........36
2.2.3 热稳定性的测定结果..............37
2.2.4 病菌毒素致病性测定..............37
2.2.4.1 病菌毒素粗提液致病性测定37
2.2.4.2 病菌毒素稀释液致病性测定37
2.3 小结.........38
3 结论与讨论................40
参考文献........44
附录................49
致谢................53