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免费下载硕士论文-真姬菇分类方法及遗传多样性研究

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资料简介
硕士论文-真姬菇分类方法及遗传多样性研究,共67页,25186字
摘 要
真姬菇(Hypsizygus marmoreus Sing.)是我国人工驯化栽培的一种著名食用菌,目
前我国虽然是真姬菇生产大国,但真姬菇菌株鉴别技术落后,同物异名现象严重,品种
多样性存在争议,品种知识产权得不到真正的保护。
拮抗(antagonism )、同工酶( isozyme )、相关序列扩增多态性(Sequence Related
Amplified Polymorphism,SRAP)和随机扩增多态性(random amplified polymorphic
DNA, RAPD)是真菌菌株鉴别中经常使用的技术,它们各有优缺点,目前尚没有关于这
几种技术在真姬菇品种鉴别中的综合分析的报道;而且 SRAP(Sequence Related
Amplified Polymorphism,SRAP)作为一种新兴的分子标记技术,尚未应用到真姬菇的
菌株鉴别中。
本研究探讨了 SRAP 技术在真姬菇菌种鉴别中应用的可能性;比较分析了拮抗、同工
酶、SRAP、RAPD 和在真姬菇菌株鉴别中的应用;并分析了我国真姬菇品种的遗传多样性。
本研究以所收集到的 12 个真姬菇菌株作为实验材料,采用拮抗试验、同工酶、RAPD
和 SRAP 技术对其进行分类。并对对这几种方法在食用菌分类中的应用进行了比较,也对供
试菌株的遗传多样性进行评价。结果表明:
1. SRAP 分析技术适用于真姬菇的分类。综合各实验方法得出结论,本研究的 12 个
真姬菇菌株,在遗传相似性系数 0.8 时,大体可以分为 6 类:(1、8、10、12)、(3、4、
5、7)、(2)、(6)、(9)及(11)。菌株 3、4、5 即真姬菇(略苦)、真姬菇(九
发)、真姬菇(塔南泊)之间的遗传相似性系数比较高,可视为同物异名。
2.结合拮抗实验结果,同工酶分析结果与利用分子生物学方法分析所得结果有少许
差异,具体表现在几类之间的遗传相似性系数上的细微不同。
3.采用 RAPD、SRAP 分子标记及同工酶技术分别对 12 个真姬菇栽培种进行聚类分析,
建立聚类图,表明拮抗、同工酶、SRAP、RAPD 所得实验结果吻合度较高。通过对这几种
技术间的稳定性和重复性的比较,SRAP 标记的稳定性和重复性最好,最适于对真姬菇的
品种进行准确的分类,同工酶标记稳定性和重复性最差。综合这三个标记技术的分析,
我们更容易地区分 12 个真姬菇栽培种。在研究中,我们也讨论了各种标记方法的优缺
点。
关键词:拮抗,同工酶,RAPD,SRAP,真姬菇
目 录
摘要 ............... 1
Abstract............ 2
前言 ............... 4
1.真姬菇的基本特征.. 4
2.食用菌的分类方法.. 5
3.立项依据及目的意义............... 10
材料与方法 ........ 12
1.供试材料 ........ 12
2.实验方法 ........ 12
2.1 拮抗实验 ....... 12
2.2 同工酶标记 ..... 12
2.2.1 主要试剂 ..... 13
2.2.2 样品制备 ..... 14
2.2.3 实验方法 ..... 14
2.3 蛋白检测 ...... 14
2.4 分子生物学鉴定 . 15
2.4.1RAPD 技术 ..... 15
2.4.2SRAP 技术 ..... 18
结果与分析......... 20
1.拮抗实验......... 20
2.供试菌株同工酶分析............... 22
2.1 酯酶同工酶 ..... 22
2.2 多酚氧化酶同工酶 ............... 22
2.3 过氧化物酶同工酶 ............... 23
3.蛋白检测......... 24
4.RAPD 标记 ........ 25
4.1DNA 的提取 ...... 25
4.2 引物筛选结果 ... 26
4.3 基因组 DNA 的扩增 ............... 27
5.SRAP 标记 ........ 30
5.1 引物筛选结果 ... 30
5.2SRAP 遗传分析 ... 30
结论与讨论......... 35
1.讨论............. 35
1.1 本实验特点 ..... 35
1.2 本实验方法的讨论 ............... 35
1.3 分类方法间的比较 ............... 37
2.结论 ............ 38
参考文献........... 39
附图 .............. 43
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