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  • 资源类别:论文
  • 资源分类:生物农医
  • 适用专业:生物化学与分子生物学
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资料简介

硕士论文-野生多孔菌不同菌株的遗传分析及桦褐孔菌的诱变育种,共127页,48843字
摘要
本文主要研究了 24 个野生多孔菌菌株之间的亲缘关系远近及 24 个菌株的液体发酵
试验。本文还对桦褐孔菌 410 菌株进行了紫外诱变和 60Co-γ射线辐射诱变,并对挑取的
菌落与原始菌株 410 进行拮抗试验、酯酶同工酶鉴定及 ISSR 分子标记以鉴定是否发生
变异。
野生多孔菌拮抗试验与酯酶同工酶试验结果显示:所有的野生种与桦褐孔菌 410 菌
株之间有很明显的拮抗现象;野生多孔菌两两之间也有很强的拮抗现象。通过聚丙烯酰
胺凝胶电泳共检测到 6 条酯酶同工酶条带,所有菌株与已确定桦褐孔菌菌株 410 之间相
似系数在 0.3333-1.0000 之间。由酯酶同工酶电泳结果,对 24 个多孔菌进行系统聚类
分析,在相似系数 0.70 水平上,划分为 4 个群。
野生多孔菌 ISSR 分子标记结果:引物 5,9,10 对所有野生多孔菌共扩增出 53 条
条带。两菌株间相似系数在 0.3840-0.9423 之间。在相似系数 0.70 水平上,划分为 9
个群。
野生多孔菌液体发酵试验表明:菌株 487 和 411 发酵液中总糖含量最高。发酵醇沉
物中 411 菌株总糖含量最高,达 25.66%;醇溶物中,菌株 457 总糖含量最高,达到 60.57%。
醇沉物中蛋白含量菌株 473 最高,达到 12.2%;菌株 410 醇溶物中蛋白含量最高,达到
9.2%。醇溶物和菌球中三萜含量均是菌株 457 含量最高,分别为 0.6459%和 0.36%。
对桦褐孔菌 410 菌株紫外诱变和 60Co-γ射线辐射诱变的菌株进行检测。拮抗试验结
果显示:诱变菌株与原始菌株 410 均无拮抗现象;酯酶同工酶聚类分析相似系数在
0.625-1 之间,在相似系数 0.80 水平上,划分为 3 个群。将酯酶同工酶与 410 相似系数
不为 1.0000 的 29 个诱变菌株,进行 ISSR 分子标记,3 个引物扩增出来的条带与 410
菌株完全相同。
关键词:拮抗;酯酶同工酶;ISSR;诱变

目 录
摘要 ......... ⅰ
ABSTRACT ....... ⅱ
前 言 ........... 1
1 多孔菌简介.....
2 桦褐孔菌简介 ...
2.1 桦褐孔菌的研究现状 ...........
2.2 形态学特征...
2.3 生物学特征...
2.4 有效成分.....
2.5 桦褐孔菌的药用价值 ...........
3 食药用菌诱变育种 ...............
4 同工酶技术及其在食药用菌上的应用
5 ISSR 分子标记技术在食药用菌上的应用 .............
第Ⅰ部分 野生多孔菌菌株的遗传分析 7
第一章 野生多孔菌拮抗试验 ........ 7
1.1 材料和方法 ... 7
1.1.1 试验材料 ... 7
1.1.2 试验方法... 8
1.2 结果与分析... 9
1.2.1 拮抗试验Ⅰ结果 ............. 9
1.3 讨论 ....... 12
第二章 野生多孔菌酯酶同工酶标记 13
2.1 材料和方法 ..
2.1.1 试验材料 ..
2.1.1.1 供试菌株
2.1.1.2 培养基成分 ..............
2.1.1.3 主要试剂
2.1.2 试验方法..
2.1.2.1 菌种的活化 ..............
2.1.2.2 酶液提取
2.1.2.3 酯酶同工酶检测 ..........
2.1.2.4 数据处理
2.2 结果与分析..
2.3 讨论 .......
第三章 野生多孔菌 ISSR 分子标记 .. 20
3.1 材料和方法 .. 20
3.1.1 试验材料 .. 20
3.1.1.1 供试菌株
3.1.1.2 培养基成分 ..............
3.1.1.3 主要试剂
3.1.2 试验方法..
3.1.2.1 菌种的活化 ..............
3.1.2.2 DNA 提取方法 ............
3.1.2.3 提取 DNA 质量检测 ........
3.1.2.4 ISSR 分析 ...............
3.1.2.5 ISSR 反应条件 ...........
3.1.2.6 扩增产物检测 ............
3.1.2.7 ISSR 引物筛选 ...........
3.1.2.8 数据处理分析 ............
3.2 结果与分析..
3.2.1 DNA 的提取
3.2.2 ISSR 引物筛选 .............
3.2.3 ISSR 遗传分析 .............
3.3 讨论 .......
第四章 野生多孔菌液体发酵产物中糖和蛋白含量比较 .. 31
4.1 材料和方法 ..
4.1.1 试验材料 ..
4.1.2 试验方法..
4.1.2.1 固体菌种的活化 ..........
4.1.2.2 液体菌种的活化 ..........
4.1.2.3 液体发酵
4.1.2.4 糖的测定
4.1.2.5 糖含量标准曲线的制作.....
4.1.2.6 发酵液总糖含量的测定.....
4.1.2.7 发酵液处理 ..............
4.1.2.8 提取物中总糖含量测定.....
4.1.2.9 蛋白测定
4.2 结果与分析 ..
4.2.1 糖含量结果与分析 ..........
4.2.2 蛋白含量结果与分析 ........
4.2.3 发酵产物的提取率分析 ......
4.3 讨论 ........
第五章 野生多孔菌发酵产物中三萜含量比较.......... 43
5.1 材料和方法 ..
5.1.1 试验材料 ..
5.1.2 试验方法..
5.1.2.1 固体菌种的活化 ..........
5.1.2.2 液体菌种的活化 ..........
5.1.2.3 液体发酵
5.1.2.4 三萜的测定 ..............
5.2 结果与分析 ..
5.2.1 三萜测定条件..............
5.2.1.1 测定波长的选择 ..........
5.2.1.2 提取溶剂
5.2.1.3 提取溶剂的浓度 ..........
5.2.1.4 提取时间的分析 ..........
5.2.1.5 显色时间及温度的选择 ....
5.2.1.6 标准曲线的建立 ..........
5.2.2 发酵产物中三萜含量 ........
5.2.2.1 菌球中三萜含量 ..........
5.2.2.2 醇溶物三萜含量分析.......
5.2.2.3 回收率的计算 ............
5.2.2.4 精密度的计算 ............
5.3 讨论.......
第Ⅱ部分 桦褐孔菌物理诱变选育新菌株的研究 ........ 55
60
6.1 材料与方法..
6.1.1 材料 .....
6.1.2 方法 .....
6.2 结果与分析 ..
6.2.1 紫外诱变菌落萌发情况 ......
6.2.2 Co-γ 诱变菌落萌发情况....
57
6.3 讨论 ........
第七章 桦褐孔菌诱变菌株拮抗试验及酯酶同工酶检测 .. 58
7.1 材料与方法..
7.1.1 材料 .....
7.1.2 方法 .....
7.1.2.1 拮抗试验
7.1.2.2 酯酶同工酶样品的制备 ....
7.1.2.3 电泳 ....
7.1.2.4 染色 ....
7.1.2.5 系统聚类分析 ............
7.2 结果与分析 ..
7.2.1 拮抗试验结果与分析 ........
7.2.2 酯酶同工酶试验结果与分析...
7.3 讨论 .......
第八章 桦褐孔菌诱变菌株 ISSR 分子标记............. 66
8.1 材料与方法.. 66
8.1.1 材料 ..... 66
8.1.2 方法 ..... 66
8.1.2.1 DNA 提取
8.1.2.2 ISSR 反应条件 ...........
8.2 结果与分析..
8.2.1 DNA 的提取
8.2.2 ISSR 遗传分析 .............
8.3 讨论 ........
结 论 .......... 69
参考文献 ....... 71
附 录 .......... 74
附表 1 120 个诱变菌株与菌株 410 相似系数表 ......... 74
附图 1 24 个野生多孔菌子实体照片. 108
附图 2 24 个野生多孔菌菌丝体照片. 110
致 谢 ......... 111

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