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资料简介
硕士论文-树舌灵芝活性物质提取及抗肿瘤活性研究,共85页,37640字
摘要
本文主要研究了树舌灵芝多糖的单糖组分和分子量分布,确定了树舌灵芝总三萜的
提取方法,并测定了不同方法提取的树舌灵芝子实体和发酵液总三萜的含量,以及树舌
灵芝生物碱组成及醇溶、醇沉酸性组分,并研究其抗肿瘤活性。
本文首先研究了树舌灵芝多糖提取物单糖组分和多糖分子量分布。结果表明: 树
舌灵芝多糖主要含有甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖及半乳糖
5 种单糖,不同样品含其他单糖的种类和含量有所差异。本文所采用的 5 个样品分别含
有 4,4,2,3,3 个不同分子量的多糖组分,其重均分子量分别为 793548.95 Da,
47375.92Da,642745.11 Da,664844.7 Da,678912.91 Da。
本文研究了树舌灵芝总三萜的测定方法,确定了总三萜的测定的最佳条件为:5%
香草醛-冰醋酸用量 0.2 mL,高氯酸用量1.0 mL, 70 ℃水浴25 min。经测定,醇沉物中
三萜含量为0.049 mg/g,而醇溶物中其含量仅为0.022 mg/g。
从树舌灵芝子实体提取三萜的pH条件实验发现:萃取液pH5.00时三萜的含量最高;
发酵液pH6.00时提取液中三萜的含量最多,可达到0.6mg/mL以上。
利用GC-MS对树舌灵芝提取物组分分析结果表明:
树舌灵芝发酵液醇溶物中共检测出7种生物碱,分别为吡咯类1种,哌嗪类1种,酰
胺类5种;发酵液醇沉物中共检测出13种生物碱,分别为亚胺类1种,吡咯类1种,酰胺
类7种,哌嗪类1种,苯胺1种,咪唑类1种,吡嗪类1种。
在醇溶酸性组分提取物中共鉴定出 7 种成分,其中有机酸 1 种,酰胺 2 种,呋喃类
1 种,酚类 3 种;在醇沉酸性组分提取物中共鉴定出 11 种组分,其中有机酸 1 种,呋喃
类 2 种,酚类 2 种,醇类 2 种,烯类 1 种,咪唑类 1 种,酯类 2 种。
提取物抗肿瘤研究表明:
三个浓度树舌灵芝子实体提取物对 H22 细胞的抑制率分别达到了 26.28%、61.71%
和 42.26%(接种一天后给药);7 天后给药组,三种剂量梯度对肿瘤抑制率分别达到了
32.44%、48.69%和 58.74%。三个浓度树舌灵芝子实体提取物对 S180 细胞的抑制率分别
达到了 15.73%、52.48%和 48.51%。
三萜及生物碱提取物对SGC细胞的抑制率都达到了50%以上,醇溶物的三萜提取物
在100μg/mL的抑制率最高,达到了80%以上。三萜和生物碱提取物对Hep细胞的抑制效
果,最高为57.1%;同树舌灵芝粗提物相比,三萜和生物碱提取物的抗肿瘤效果明显高
于树舌灵芝的粗提物。
关键词:树舌灵芝;多糖;三萜;生物碱;抗肿瘤
目录
摘要..........I
Abstract........ II
第一章 绪论....... 1
1 树舌的化学成分........... 1
1.1 树舌灵芝多糖 ..... 1
1. 2 树舌中甾体化合物 ............. 3
1. 3 三萜类化合物 .... 3
1. 4 脂类 . 4
1. 5 其他化学成分 .... 4
2 树舌灵芝生物活性研究 ................ 5
2.1 提高免疫力 ......... 5
2.2 抗肿瘤 5
2.3 抗病毒 5
2.4 抗菌消炎 ............. 6
2.5 其他药理活性 ..... 6
第二章 树舌灵芝多糖分子量分布及其单糖组分的研究....... 8
1 材料与方法.. 8
1.1 试剂 . 8
1.2 仪器 . 8
1.3 方法 . 8
2 结果与分析................ 10
2.1 单糖组分测定 .... 10
2.2 多糖分子量分布测定 ......... 15
第三章 树舌灵芝总三萜测定方法的研究............ 18
1 材料与方法 18
1.1 试剂 ................ 18
1.2 仪器 ................ 18
1.3 总三萜测定条件的选择 .... 18
1.4 正交试验 ........... 19
1.5 标准曲线的制作 ................ 19
1.6 精密度测定 ....... 19
2 结果与分析 20
2.1 总三萜的测定条件 ............ 20
2.2 正交试验结果 ... 22
2.3 标准曲线的制作 ................ 24
2.4 精密度测定 ....... 24
3 讨论............ 24
第四章 树舌灵芝发酵液提取物总三萜的提取及测定......... 25
1 材料与方法 25
1.1 仪器与药品 ....... 25
1.2 材料 ................ 25
1.3 试验方法 ........... 25
1.4 总三萜定性检测 ................ 27
1.5 总三萜定量测定 ................ 27
1.6 加样回收率测定 ................ 27
2 结果与分析 28
2.1 三萜的定性检测 ................ 28
2.2 总三萜的定量测定结果 .... 29
3 讨论............ 30
第五章 树舌灵芝子实体和发酵液不同 pH 条件提取三萜的研究 ...... 31
1 材料与方法 31
1.1 仪器与药品 ....... 31
1.2 材料 ................ 31
1.3 子实体提取方法的选择 .... 31
2 结果与分析 33
2.1 树舌灵芝子实体三萜提取条件的选择 .............. 33
2.2 子实体提取三萜含量的测定结果 ..... 35
2.3 发酵液提取液三萜含量测定 ............. 36
3 讨论............ 37
第六章 树舌灵芝发酵液生物碱成分分析............ 38
1 材料与方法 38
1.1 仪器与药品 ....... 38
1.2 材料 ................ 38
1.3 实验方法 ........... 38
2 结果与分析 40
2.1 醇溶物中生物碱的 GC-MS 分析结果................ 40
2.2 醇沉物中生物碱的 GC-MS 分析结果................ 43
3 讨论............ 48
第七章 树舌灵芝醇溶、醇沉酸性组分分析........ 49
1 材料与方法 49
1.1 仪器与药品 ....... 49
1.2 材料 ................ 49
1.3 实验方法 ........... 49
2 结果与分析 51
2.1 ESAC 的 GC-MS 分析结果 ................ 51
2.2 醇沉酸性组分分析 ............ 53
第八章 树舌灵芝菌株抗肿瘤活性的研究............ 57
1 材料与方法 57
1.1 试验材料 ........... 57
1.2 试验方法 ........... 57
2 结果与分析 58
2.1 对实体瘤 H22 的抑制作用 . 58
2.2 各个剂量的药物对小鼠体重变化的影响 .......... 59
ii
2.3 对实体瘤 S180 的抑制作用 60
2.4 对实体瘤 S180 小鼠体重的影响 ......... 61
3 结论与讨论 62
3.1 结论 ................ 62
3.2 讨论 ................ 62
第九章 三萜和生物碱抗肿瘤活性测定................ 63
1 材料和方法. 63
1.1实验材料........ 63
1.2 溶液的配制 ....... 63
1.3 肿瘤细胞的培养 ................ 64
1.4 试验方法 ........... 64
2 结果与分析 65
2.1 三萜和生物碱提取物对 SGC 和 Hep 肿瘤细胞的抑制作用 .............. 65
2.2 树舌粗提物对两种肿瘤细胞的影响 . 66
2.3 树舌灵芝三萜和生物碱提取物对正常来源的人肝细胞的影响......... 67
3 讨论............ 68
第十章 结论和讨论.............. 69
1 结论............ 69
1.1 树舌灵芝多糖单糖组分及分子量分布的测定 .. 69
1.2 树舌灵芝总三萜测定方法的研究 ..... 69
1.3 树舌灵芝发酵液提取物总三萜的提取剂测定 .. 69
1.4 树舌灵芝子实体和发酵液不同 pH 条件提取三萜的研究. 69
1.5 树舌灵芝发酵液生物碱成分分析 ..... 70
1.6 树舌灵芝醇溶、醇沉酸性组分分析 . 70
1.7 树舌灵芝抗肿瘤活性的研究 ............. 70
1.8 三萜和生物碱抗肿瘤活性测定 ......... 70
2 讨论............ 70
2.1 关于试验结果 ... 70
2.2 本研究的未尽事宜和不足之处 ......... 71
2.3 进一步研究的方法和建议 . 71
参考文献....... 72
致谢....... 76
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