学海网

硕士论文-桑黄培养技术及其胞外多糖抗肿瘤作用的研究，共76页，38107字
摘 要
本论文对桑黄的固液体培养条件进行了优化研究，并对三个桑黄菌株粗多糖进行了
抗肿瘤及其对瘤鼠血液生理生化指标的影响研究。
通过液体发酵培养，研究了不同培养基、不同培养条件对桑黄菌丝生长的影响，用
直观分析法对正交试验结果进行了分析，结果表明：优化培养基配方为玉米粉含量为 5%、
麸皮含量为 4.5%、KH2PO4 为 0.2%、MgSO4 为 0.1%、、VB1 为 30μg/100ml、VB240μg/100ml。
利用 L9(34)正交试验筛选出了液体发酵的优化培养条件，优良的液体培养条件是：
温度 26℃，转速 130rpm,接种量 15%,初始 pH6.5,液体种子培养时间 6d,发酵时间 8d,装
液量 28%。在正交试验筛选出的培养条件下扩大培养，验证了发酵罐发酵与摇瓶培养的
菌丝产量基本一致。
对三个桑黄菌株的固液体培养性状进行了比较研究，结果表明三个菌株中 S3 的生长
性状最佳，且发育出子实体，故以 S3 为优良菌株。对于桑黄的栽培料配方以培养基 3 号
配方为最优。
对 S1、S2、S3 三个桑黄胞外粗多糖的抗肿瘤作用、免疫调节功能及其血液的生理生化
指标进行了试验研究。利用小鼠 S180 及 H22 细胞建立局部转移模型，分别以 100 mg/(kg.d)、
200mg/(kg.d)、400mg/(kg.d)不同剂量按灌胃途径给以药物和定剂量对照剂，计算抑瘤
率、内脏指数及血液生理生化指标。结果表明，三个桑黄菌株粗多糖均具有不同程度的
抑瘤效果，桑黄粗多糖的抗肿瘤作用与其剂量有关，其中 S1 粗多糖 200mg/(kg.d)、S2、
S3 粗多糖 400mg/(kg.d)连续灌胃 12d，可明显抑制小鼠肿瘤的生长，促进小鼠生长及增
强免疫器官的功能；而且，能促进白血细胞的生长，对其他几个主要血常规指标无不良
影响。对小鼠肝功有一定增强作用。相比较三菌株多糖而言，S2 粗多糖具有最佳的抑瘤
效果，其高剂量 400mg/(kg.d)对 S180 及 H22 的抑制率分别为 61.0% 和 52.2%；而 S1粗多糖
的中剂量 200mg/(kg.d)为最佳计量，对 S180 及 H22 的抑制率分别为 65.0% 和 46.3%
关键词：桑黄；固液体培养；胞外多糖；抗肿瘤；免疫
目录
中文摘要 .... 1
英文摘要 .... 2
缩略词表 .... 4
文献综述 .... 5
1 前言 ..... 5
2 食用菌液体培养研究 ......... 5
3 药用真菌多糖的研究 ......... 8
4 桑黄的研究现状............ 10
研究内容
第一部分 液体深层发酵 ........ 15
1 试验材料和方法............. 15
1.1 实验材料 ................ 15
1.1.1 主要仪器............... 15
1.1.2 药品 . 15
1.1.3 原料 . 15
1.1.4 菌种 . 15
1.1.5 活化培养基的制备 ....... 15
1.1.6 液体培养基的制备 ....... 15
1.1.7 二级摇瓶培养基的制备 ... 16
1.1.8 桑黄发酵罐培养基制备 ... 16
1.2 方法 ... 16
1.2.1 培养 . 16
1.2.2 液体培养基中各种营养成分的筛选........... 16
1.2.3 液体发酵条件对菌丝生长的影响 ............ 17
1.2.4 观测方法............... 18
1.2.5 胞内外粗多糖的提取方法 . 18
1.2.6 菌丝体及发酵液中多糖含量的测定........... 19
2 结果与分析 ................ 20
2.1 培养基中营养成分的筛选 ... 20
2.1.1 液体培养基中氮源的确定 . 20
2.1.2 液体培养基中氮源浓度的确定 .............. 21
2.1.3 最优培养基配方的确定 ... 23
2.2 液体培养条件的筛选 ....... 24
2.2.1 液体发酵培养过程中桑黄菌丝体生长及胞内外多糖积累曲线 ....... 24
2.2.2 液体培养条件的优化 ..... 26
2.2.3 发酵罐扩大培养条件与二级摇瓶筛选出的培养条件一致性研究..... 27
3 讨论与结论................ 27
3.1 讨论 ... 27
3.1.1 摇瓶培养过程中的污染率的控制 ............ 27
3.1.2 玻璃珠和通气状况对菌球形态及产量的影响 ... 27
3.1.3 种子保存时间对菌丝产量的影响 ............ 28
3.1.4 摇瓶培养过程中震荡频率对菌体生长的影响 ... 28
3.2 结论 ... 29
第二部分 三个桑黄菌株的固液体培养性状.......... 30
1 材料和方法 30
1.1 实验材料 30
1.1.1 主要仪器............... 30
1.1.2 菌种 . 30
1.1.3 培养基 ................ 30
1.2 试验方法 ................ 30
1.2.1 菌丝生长速度........... 30
1.2.2 液体培养时生长性状的观测 ................ 30
1.2.3 原种制作............... 31
1.2.4 基础培养料配方筛选及制作 ................ 31
2 结果与分析 ................ 31
2.1 三个桑黄菌株在 PDA 培养基上生长状况 ......... 32
2.2 三个桑黄菌株在液体培养基中的生长状况 ....... 32
2.3 三个桑黄菌株原种菌丝生长情况 ............... 34
2.4 栽培基础培养料配方筛选及菌丝生长比较试验 .. 34
3 讨论及结论................ 35
第三部分 三个桑黄菌株胞外粗多糖抗肿瘤作用研究及其对血液生理生化指标的影响
1 材料和方法 37
1.1 试验材料 ................ 37
1.1.1 主要仪器............... 37
1.1.2 主要试剂............... 37
1.1.3 S1、S2、S3 三个桑黄菌发酵上清液提取的桑黄粗多糖 ............ 37
1.1.4 药物 . 37
1.1.5 动物 . 37
1.2 方法 ... 37
1.2.1 多糖提取物的制备 ....... 37
1.2.2 多糖含量的测定 ......... 37
1.2.3 动物模型的制作 ......... 38
1.2.4 试验条件............... 38
1.2.5 给药方式............... 38
1.2.6 分组 . 38
1.2.7 指标测定............... 39
1.2.8 统计方法............... 39
2 结果与分析 ................ 40
2.1 三个桑黄菌胞外粗多糖中多糖含量的测定....... 40
2.2 三个桑黄菌胞外粗多糖对荷瘤小鼠抑瘤率及脏器的影响 ............ 40
2.2.1 三个桑黄菌胞外粗对小鼠日常活动的影响 ..... 40
2.2.2 三个桑黄菌胞外粗对体重和抑瘤率的影响 ..... 40
2.2.3 三个桑黄菌胞外粗对肝脏指数、胸腺指数、脾脏指数的影响....... 42
2.3 三个桑黄菌株胞外粗多糖对小鼠血液生理生化指标的影响 .......... 45
2.3.1 三个桑黄菌株胞外粗多糖对瘤鼠血液生理指标的影响 ............ 45
2.3.2 三个桑黄菌株胞外粗多糖对瘤鼠血液生化指标的影响 ............ 46
3 讨论 .... 49
3.1 三个桑黄菌株胞外粗多糖对荷瘤小鼠抑瘤率及脏器的影响 .......... 49
3.2 三个桑黄菌株胞外粗多糖对瘤鼠血液生理指标的影响 ............. 49
3.3 三个桑黄菌株胞外粗多糖对瘤鼠血液生化指标的影响 ............. 50
4 结论 .... 51
参考文献 .. 52
附录 ... 56