学海网

硕士论文-复合螺旋藻多糖与银杏叶有效成分抗氧化抗衰老作用研究，共69页，37711字
摘要
本试验以螺旋藻多糖与银杏叶有效成分——银杏黄酮、银杏内酯为材料，对螺旋藻
多糖与银杏黄酮、银杏内酯以不同剂量和不同配比，在抗氧化抗衰老方面进行了研究，
获得如下研究成果：
1、复合螺旋藻多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠抑制作用研究
采用每天颈背皮下注射 D-半乳糖 125mg.kg-1.d-1 造小鼠衰老模型。
高剂量（200mg·kg-1·d-1）、中剂量（100mg·kg-1·d-1）、低剂量（50mg·kg-1·d-1）螺旋藻
多糖与银杏叶有效成分（总黄酮含量≥24％、银杏内酯含量≥6％）按 1:1、1:2 和 2:1 的
比例复合分别灌服小鼠，为期 42d，检测免疫器官重量、血清 SOD 酶活性和心肌、脑
MDA 含量等相关衰老指标。
高剂量螺旋藻多糖：银杏叶有效成分=1:2 时，胸腺指数达到最大，比模型组提高
37.19%（P<0.01）；PSP:GBE=1:1 时，脾指数达到最大，比模型对照组提高 12.11%；
PSP:GBE=2:1 时，小鼠血清 SOD 活力最高，比模型对照组提高 38.78%(P<0.01)。
PSP:GBE=2:1 时，心肌和脑 MDA 含量最低，表明该配比下药物发挥最大的协同增效作
用，抑制效果最好。
中剂量螺旋藻多糖：银杏叶有效成分=1:2 时，胸腺指数达到最大，比模型组提高
32.64%（P<0.01）；PSP:GBE=1:1 时，脾指数达到最大；PSP:GBE=2:1 时，小鼠血清 SOD
活力最高，比模型对照组提高 29.01% （P<0.01）。从心肌 MDA 含量来看，复合组
PSP:GBE=2:1 时，药物发挥最大的协同增效作用，抑制效果最好；从脑 MDA 含量来看，
PSP:GBE=2:1 时，与模型组对照，降低比例达到 23.53%（P<0.01）。
低剂量螺旋藻多糖：银杏叶有效成分 =1:2 时，胸腺指数最大，比模型组提高
23.56%(P<0.01)；PSP:GBE=2:1 时，脾指数最大，比模型对照组提高 7.24%（P<0.01）；
PSP:GBE=1:1 时，小鼠血清 SOD 活力最高。从心肌和脑 MDA 含量来看，PSP:GBE=2:1
时最低，表明该剂量该配比下的药效最好。
2、复合螺旋藻多糖体外抗氧化作用研究
采用邻苯三酚自氧化法、Feton 反应产生 OH-和 H2O2 清除试验，检测螺旋藻多糖与
银杏叶有效成分按 1:1、1:2 和 2:1 的比例复合对上述自由基离子的清除率。H2O2 清除率
试验结果表明，在浓度达到 0.8mg/mL 时，其清除率均比相应的单一组高，其中清除率
最高的是 PSP:GBE=2:1 组，在浓度为 1.2mg/mL 时清除率达到 87.4%。超氧阴离子清除
试验结果表明，PSP:GBE=1:2 组的变动幅度最大，并且在最终浓度达到 0.5mg/mL 时，
其清除率所有组中最高，达到 72.3%。羟自由基的产生及清除活性测定结果表明，
PSP:GBE=2:1 时，清除率最大。
3、复合螺旋藻多糖对果蝇寿命试验研究
将 24h 内羽化的果蝇分组，按照 1.00%、0.50%、0.25%浓度配制供试药物培养基，
供试药物培养基螺旋藻多糖与银杏叶有效成分按 1:1、1:2、2:1 三种比例复合，每天定
时统计果蝇死亡情况，计算平均寿命和最高寿命。
复合螺旋藻多糖对果蝇平均寿命的影响，高剂量组意外对其表现出负抑制，中、低
剂量 PSP:GBE=2:1 组分别比空白对照组平均寿命提高了 5d 和 8d。与空白对照组相比，
单一螺旋藻多糖组高、中、低剂量的最高寿命分别延长了 9d，8d，5d，与剂量成正相关；
而单一银杏内酯分别比空白对照组提高了 4d，6d，8d，与剂量成负相关。
4、复合螺旋藻多糖对人乳腺癌 231 细胞和胃癌 MGC 细胞抑制作用研究
螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）1:1 比例复合组、1:2 比例复合组和
2:1 比例复合组对人乳腺癌 231 细胞的抑瘤率，高剂量时分别比空白对照组提高 93.32％
（P＜0.01）、57.83％（P＜0.01）和 44.95％（P＜0.01）；中剂量时分别比空白对照组提
高 67.52％（P＜0.01）、59.93％（P＜0.01）和 41.72％（P＜0.01）；低剂量时分别比空白
对照组提高 54.22％（P＜0.01）、48.56%（P＜0.01）和 40.26％（P＜0.01）。试验发现单
一成分的螺旋藻多糖组对人乳腺癌 231 细胞有较好的抑制作用，随着剂量的降低药效逐
渐降低。复合螺旋藻多糖对人乳腺癌 231 细胞的抑制作用，高剂量组 1:1 时抑制效果最
好，抑制率达到 93.32％。表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用达到最大。
螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）1:1 比例复合组、1:2 比例复合组和
2:1 比例复合组对人胃癌 MGC 细胞的抑制率，高剂量时分别比空白对照组提高 92.44％
（P＜0.01）、26.36％（P＜0.01）和 71.32％（P＜0.01）；中剂量时分别比空白对照组提
高 62.37％（P＜0.01）、20.57％（P＜0.01）和 24.15％（P＜0.01）；低剂量时分别比空白
对照组提高 27.94％（P＜0.01）、30.36%（P＜0.01）和 17.92％（P＜0.01）。试验发现单
一成分的螺旋藻多糖组对人胃癌 MGC 细胞也有较好的抑制作用，并呈剂量依赖性。高、
中剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌 MGC 细胞的抑制作用，1:1 比例配比时抑制效果最好。
其中高剂量组 1:1 配比时抑制率达到 92.4％。表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同
增效作用最大。5、高剂量复合螺旋藻多糖对小鼠 S180 肉瘤抑制作用研究
高剂量（200 mg·kg－1·d－1）螺旋藻多糖与银杏叶有效成分按 1:1、2:1 和 1:2 的比例
复合。分别给接种 S180 肉瘤的荷瘤小鼠灌服此三种复合制剂和螺旋藻多糖、银杏黄酮、
银杏内酯三种单一成分，观察对小鼠 S180 肉瘤的抑制作用。螺旋藻多糖与银杏叶有效成
分 1:1 比例复合组、2:1 比例复合组和 1:2 比例复合组的抑瘤率分别比空白对照组提高
63.774％（P＜0.01）、46.883％（P＜0.01）和 40.282％（P＜0.01）；单一成分螺旋藻多
糖组、银杏黄酮组和银杏内酯组的抑瘤率分别比空白对照组提高 30.728％（P＜0.05）、
34.112％（P＜0.05）和 51.220％（P＜0.01）。与空白对照组相比，试验组小鼠的脾指数、
胸腺指数和外周血白细胞数都无显著差异（P＞0.05）。高剂量螺旋藻多糖与银杏叶有效
成分复合使用，对抑制小鼠 S180 肉瘤能产生协同增效作用，且对小鼠未见免疫损伤。
关键词：螺旋藻多糖；银杏叶有效成分；D-半乳糖；小鼠；果蝇；S180 肉瘤； MGC 细胞；
231 细胞
目 录
摘要 ............1
ABSTRACT... 4
英文缩写词表 7
第一章 文献综述 .......8
1 螺旋藻多糖研究现状 ...........8
1.1 螺旋藻多糖的免疫调节和延缓衰老功能 ..9
1.2 螺旋藻多糖抗肿瘤作用 ....9
1.3 抗辐射作用 .........10
1.4 提高免疫力和抗衰老作用 ...........10
2 银杏黄酮 ...10
2.1 心血管功能 .........10
2.2 清除自由基活性 . 11
2.3 抗辐射作用 ......... 11
2.4 抗肿瘤抗癌功能作用 ......12
3 银杏内酯 ...12
3.1 抗血小板聚集因子 ..........12
3.2 对心血管系统作用 ..........13
3.3 清除自由基作用 .13
3.4 抗缺氧作用 .........13
4 银杏黄酮内酯 ........13
第二章 复合螺旋藻多糖与银杏叶有效成分抗衰老作用研究 ...........15
1 复合螺旋藻多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠抑制作用研究 ....15
1.1 材料和仪器 ........15
1.1.1 试剂 .....15
1.1.2 试验动物 ..........15
1.1.3 仪器 .....15
1.2 试剂配制 15
1.3 试验方法 ............17
1.3.1 小鼠饲养管理 ..17
1.3.2 小鼠分组与给药剂量 ..17
1.3.3 造模方法 ..........17
1.4 观察指标及检测方法 .....18
1.4.1 试验小鼠一般情况的观察 ........18
1.4.2 血清 SOD 抽提液的制备 .........18
1.4.3 免疫器官指数的测定 ..18
1.4.4 血清 SOD 活性检测 ....18
1.4.5 心肌 MDA 含量检测...18
1.4.6 大脑皮层脂质过氧化物含量的测定 .....19
1.4.7 统计学处理 .....19
1.5 试验结果 20
1.5.1 试验小鼠一般情况的观察 .......20
1.5.2 小鼠胸腺和脾脏指数 ..20
1.5.3 小鼠血清 SOD 酶活性 .22
1.5.4 小鼠心肌和脑 MDA 含量 .........23
1.6 讨论 ........24
2 复合螺旋藻多糖对果蝇寿命作用研究 .......26
2.1 仪器和材料 .........26
2.1.1 仪器 .....26
2.1.2 材料 .....26
2.1.3 试验果蝇 ..........26
2.1.4 培养基 .27
2.2 方法 ........27
2.2.1 药物培养基配制 ...........27
2.2.2 试验步骤 ..........28
2.2.3 平均寿命的观察 ...........28
2.2.4 最高寿命 ..........28
2.3 试验结果 28
2.4 讨论 ........30
第三章 复合螺旋藻多糖体外抗氧化作用研究 .........32
1 试验材料 ...32
2 方法 ...........32
2.1 H2O2 清除能力测定.........32
2.2 超氧阴离子清除试验 ......32
2.3 羟自由基的产生及清除活性测定 ............32
3 试验结果 ...33
3.1 H2O2 清除率试验结果.....33
3.2 超氧阴离子清除试验结果 ...........34
3.3 羟自由基的产生及清除活性测定结果 ....35
4 讨论 ...........35
第四章复合螺旋藻多糖与银杏叶有效成分抗肿瘤作用研究 38
1 高剂量复合螺旋藻多糖对小鼠 S180 肉瘤的抑制作用研究..38
1.1 材料 .......38
1.1.1 螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 ............38
1.1.2 环磷酰胺 .........38
1.1.3 动物及肿瘤细胞 ..........38
1.1.4 主要仪器及器械 ..........38
1.1.5 灌服药品配制 .38
1.2 试验方法 ............39
1.2.1 小鼠饲养管理 .39
1.2.2 试验方法 .........39
1.3 数据处理 ............40
1.4 试验结果 ............40
1.5 讨论 .......41
2 复合螺旋藻多糖对人乳腺癌 231 细胞和胃癌 MGC 细胞抑制作用研究....42
2.1 材料 ........43
2.1.1 螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 43
2.1.2 主要仪器 .........43
2.1.3 肿瘤细胞 ..........43
2.1.4 主要试剂及其配制 .......43
2.1.4.1 主要试剂 .......43
2.1.4.2 试剂配制 .......43
2.1.5 培养器皿的处理 ...........44
2.1.6 供试药物的配制 ...........44
2.2 方法 ........46
2.2.1 细胞的培养与传代 .......46
2.2.2 试验方法 ..........46
2.3 试验结果 46
2.4 讨论 ........49
结论及后续工作建议 ............51
1 主要结论 ...51
1.1 复合螺旋藻多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠抑制作用研究 .51
1.2 复合螺旋藻多糖体外抗氧化作用研究 ....51
1.3 复合螺旋藻多糖对果蝇寿命试验研究 ....51
1.4 复合螺旋藻多糖对人乳腺癌 231 细胞和胃癌 MGC 细胞抑制作用研究.51
1.5 高剂量复合螺旋藻多糖对小鼠 S180 肉瘤抑制作用研究 51
2 后续工作建议 ........52
参考文献 ......53
致谢 ……………56