学海网

硕士论文-甜菜夜蛾NPV莱阳株及增效因子对其作用的研究，共50页，27369字
摘 要
甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spotoptera exigua Nuclear Polyhedrosis Virus, SeNPV）是
一种能有效防治甜菜夜蛾的病原微生物，作为生物杀虫剂已受到人们的广泛关注。同时，
如何提高病毒的杀虫效果也成为亟待解决的问题。本试验主要对甜菜夜蛾核型多角体病
毒莱阳株的生物学特性以及增效因子的增效作用进行了研究，主要结果如下：
1 不同剂量的SeNPV莱阳株分别感染不同龄期的甜菜夜蛾幼虫，结果发现，同一病
毒剂量下，低龄幼虫非常敏感，随着龄期的增加，幼虫敏感性下降。
2 将SeNPV莱阳株以3×107 PIB/头分别感染棉铃虫（Helicoverpa armigera）、粘虫
（Mythimna separata）、粉纹夜蛾（Trichoplusia ni）、甜菜夜蛾等多种试虫，结果发现
SeNPV莱阳株只感染甜菜夜蛾幼虫，说明SeNPV莱阳株具有高度的宿主专化性。
3 电镜结果显示，SeNPV莱阳株和国外株的形态相似，多角体直径大小约为1.0～2.0
μm，病毒粒子呈杆状，大小约为270～290 nm×40～50 nm，每个病毒束包含1～5个粒子。
4 通过对SeNPV莱阳株和国外株的病毒粒子蛋白SDS-PAGE分析以及病毒基因组
DNA限制性酶切图谱分析，未发现二者有明显不同。
5 利用设计的特异性引物从带有粉纹夜蛾颗粒体病毒（Trichoplusia ni granulovirus,
TnGV）增效蛋白的质粒p3FVEF中扩增出约2.7 kb的目的片段，将其克隆至原核表达载
体pET21b中，在大肠杆菌（E. coli）BL21(DE3)中诱导表达出约104 kDa的蛋白。生物测
定结果显示，表达产物与SeNPV混合处理的LT50为146.0 h，SeNPV单独处理的LT50为
146.2 h，二者差异不显著，未发现TnGV增效蛋白表达产物对SeNPV有明显的增效作用。
6 以苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）基因组DNA为模板，设计特异性引
物，PCR扩增出1.6 kb的目的片段，将其分别克隆至原核表达载体pET30a和转移载体
pFastBac中，分别在大肠杆菌和草地贪夜蛾细胞系Sf-9中表达了60 kDa的蛋白。将该表
达产物饲喂5龄甜菜夜蛾幼虫后取其围食膜，电镜结果显示，处理的围食膜上形成无数
孔洞。生物测定结果显示在大肠杆菌和细胞系Sf-9中的表达产物分别与甜菜夜蛾核型多
角体病毒（SeNPV）混合处理四龄甜菜夜蛾幼虫时，其LT50与对照比较分别缩短了13.3 h
和19.5 h。
关键词：甜菜夜蛾核型多角体病毒；生物学特性；增效蛋白；几丁质酶A；增效作
用
目 录
中文摘要……..1
英文摘要……..2
前言
1SeNPV 的研究进展……………………...1
2病毒增效剂研究概况……………………3
3研究的目的和意义………………………8
试验材料与方法
1试验材料…9
2试验方法..12
2.1SeNPV 莱阳株的毒力测定…………..12
2.2SeNPV 莱阳株的寄主范围测定……..12
2.3SeNPV 莱阳株的形态观察…………..13
2.4SeNPV 莱阳株的生化特性分析……..13
2.5TnGV 增效蛋白基因的克隆表达和活性测定………………………14
2.6AcMNPV chiA 基因的克隆表达和增效作用测定………………….18
结果与分析
1SeNPV 莱阳株的毒力………………….21
2SeNPV 莱阳株寄主范围测定………….21
3SeNPV 莱阳株的形态…. ……………...21
4SeNPV 莱阳株的生化特性分析……….22
5TnGV 增效蛋白基因的克隆表达和活性测定………………………...23
6AcMNPVchiA 基因的克隆表达和增效作用测定…………………….26
讨论…………31
结论…………34
参考文献……35
附录
缩略词38
致谢…………39
硕士期间发表的学术论文…………………40
导师组意见…41
学位论文独创声明及学位论文版权使用授权书…………………………42