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硕士论文-萝卜游离小孢子培养技术的研究，共77页，36631字
摘 要
游离小孢子培养技术在植物育种以及相关的基础研究中具有广泛的应用前景。它是
在花药培养基础上发展而来的一种单倍体诱导技术。萝卜是我国栽培的第三大蔬菜作
物，研究萝卜游离小孢子培养对品种改良、加速育种进程具有重要意义。对萝卜游离小
孢子培养研究表明，萝卜属是十字花科作物中最不容易进行游离小孢子培养成功的材料
之一。为了建立高效的萝卜游离小孢子培养再生体系，本试验对其进行了系统研究。主
要研究了基因型、植株生长条件、花药预处理、胚性小孢子选择、培养基及培养条件对
萝卜小孢子培养中胚胎发生及再生的影响。
通过研究得出如下结论：
（1）基因型是限制萝卜游离小孢子培养成胚的主要因素，在所研究的 38 个基因型中，
共在 9 个基因型中获得了胚状体及再生苗，占全部材料的 23.68％；这些基因型分
属于秋青、春白、心里美 3 种类型。
（2）植株生长条件影响萝卜小孢子培养的成胚率，春季取材进行培养比冬季取材成胚
率高。
（3）适合小孢子培养的时期为单核晚期，花蕾大小在 2～4mm 之间，而且不同萝卜品
种适合培养的花蕾大小不同；正确地选择适合胚胎发生能力高的小孢子是萝卜游离
小孢子培养得到小孢子胚的关键所在，即选择胚性小孢子是小孢子培养成功的关
键，试验中发现利用 Percoll 密度梯度离心法分离胚性小孢子是有效的方法，萝卜
胚性小孢子主要集中在浓度为 1.055g/cm3 和 1.068 g/cm3 之间。
（4）4℃低温条件下处理 3 天的小孢子可保持较高的存活率；培养基中添加活性炭、蔗
糖可以提高萝卜小孢子存活率。
（5）花药预处理可以提高成胚率：预处理对萝卜游离小孢子培养的影响最大，是萝卜
游离小孢子成胚的关键因素，未经预处理时 38 个基因型的萝卜中，仅有 4 种基因
型得到了胚状体，占 10.53％,经对花药进行不同的预处理后有 9 种基因型的萝卜得
到了小孢子胚，占 23.68％，提高了 13.15 个百分点，并且以 B5 培养基中添加甘露
醇或秋水仙素对萝卜花药进行预处理效果更明显，但不同的基因型对处理的时间及
甘露醇、秋水仙素的浓度要求有差异。
（6）培养条件也是影响萝卜游离小孢子培养成功的重要因素，本试验中 33℃热激 24h
或 48h 有利于萝卜小孢子培养成胚。
（7）2,4-D、6-BA 对萝卜游离小孢子培养成胚有促进作用，但不是关键因素。
（8）发育正常的子叶期胚能够成苗，成苗率达到 100％，而畸形胚的成苗率仅有 50％。
（9）本试验筛选出萝卜小孢子成苗培养基：B5-2＋0.2mg/L6-BA+0.8%琼脂；
萝卜小孢子苗生根培养基为：B5-2＋0.2mg/LNAA+0.5%琼脂。
（10）萝卜小孢子苗有一定的自然加倍率，其中秋水仙素预处理花药可以提高萝卜游离
小孢子培养再生苗的加倍率。
（11）再生株以二倍体为主，其比率为 60%左右。
通过上述研究，建立了萝卜游离小孢子培养的技术体系。
关键词：萝卜；游离小孢子培养；胚胎发生；植株再生
目录
摘 要 ............... I
Abstract ......... III
前言 .......... 1
1 材料与方法................. 14
1.1 供试材料 14
1.2 试验方法 15
1.2.1 供体植株的培育... 15
1.2.2 小孢子发育时期的细胞学观察............... 16
1.2.3 花蕾长度及平均核数的关系. 16
1.2.4 小孢子培养方法... 16
1.2.5 花药预处理方法研究............. 16
1.2.6 激素对萝卜小孢子膨大率及成胚率的影响............. 17
1.2.7 活性炭对成胚率的影响研究方法........... 18
1.2.8 Percoll 密度梯度离心方法 ..... 18
1.2.9 胚状体的发芽与再生............. 19
1.2.10 再生株的倍性测定............... 19
2 结果与分析 20
2.1 萝卜花蕾长度与小孢子发育时期的关系.. 20
2.2 花蕾长度及平均核数的关系.... 21
2.3 供体植株的生长条件对萝卜小孢子培养的影响 ........ 22
2.4 基因型对萝卜离体小孢子胚胎发生的影响................ 22
2.5 萝卜离体小孢子活力的研究.... 24
2.5.1 萝卜不同开花时期花蕾中小孢子的活力................. 24
2.5.2 萝卜不同位置花序的花蕾中小孢子活力................. 24
2.5.3 不同环境条件下小孢子活力测定........... 25
2.6 花药预处理对萝卜小孢子存活率及胚胎发生的影响 26
2.6.1 不同温度预处理对萝卜小孢子存活率的影响 ......... 26
2.6.2 培养基预处理对小孢子活力的影响....... 27
2.6.3 花药预处理对萝卜小孢子培养中胚胎发生的影响 . 29
2.7 培养基对萝卜小孢子胚胎发生的影响...... 31
2.7.1 基本培养基及其培养成分..... 31
2.7.2 激素对萝卜小孢子胚胎发生的影响....... 31
2.7.3 培养基中添加活性炭对萝卜小孢子培养的影响 ..... 33
2.8 Percoll 密度梯度离心对萝卜胚性小孢子的选择......... 34
2.9 培养条件对萝卜小孢子培养的影响.......... 35
2.10 培养方式对萝卜小孢子培养的影响........ 37
2.11 再生植株的获得.... 38
2.12 萝卜游离小孢子苗的倍性鉴定................ 38
3 讨论 ........... 41
3.1 萝卜小孢子活力的影响因素.... 41
3.2 萝卜游离小孢子培养胚胎发生的影响因素................ 41
3.3 预处理花药对萝卜游离小孢子培养再生植株倍性的影响 .......... 43
4 结论 ........... 44
参考文献 ...... 45
图版及图版说明............. 51
附录 A........... 56
附录 B........... 57
缩略词表....... 58
致 谢............. 59