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硕士论文-白粉寄生孢的发生、致病力研究及ISSR分子指纹分析，共105页，54248字
摘要
本文以白粉菌的重寄生菌-白粉寄生孢 (Ampelomyces quisqualis Ces. ex
Schlecht.,AQ)为研究对象，从生态多样性、培养性状、致病力分化及 ISSR 分子
指纹分析等几个方面对来自国内部分地区不同来源的白粉寄生孢进行了系统研
究，研究结果如下：
1 国内 11 省白粉寄生孢的自然发生情况。在 450 余份标样中，共发现 23 科
43 属 47 种感染白粉菌的植物标本中有白粉寄生孢标本 89 份,这些白粉寄生孢寄
生于 10 属 33 种白粉菌上，发生率为 4.17~50%，重寄生强度为 0.4~42%，主要
发生于葫芦科（Cucurbitaceae）、菊科（Compositae）、蔷薇科（Rosaceae）、豆科
（Leguminosae）等寄主植物及白粉菌属(Erysiphe)、单囊壳属(Sphaerotheca)等寄
主白粉菌上。研究发现白粉寄生孢的中国新记录寄主植物有：龙芽草(Agrimonia
pilosa)、木防己(Cocculus orbiculatus)、绣球花(Hydrangea macrophylla)、胡桃
(Juglans regia)、南牡蒿(Artemisia eriopoda)、南蛇藤(Celastrus orbiculatus)、梅
(Armeniaca mume)、委陵菜(Potentilla chinensis)、泽兰(Erigeron divaricatus)、甘
蓝(Brassica oleracea)、白芷(Angelica dahurica)、紫茉莉(Mivabilis jalapa)、黑绿
豆(Phaseolus mungo)、牛膝(Achyranthes bidentata)及悬铃木(Platanus acerifolia)
等 15 种。中国新记录寄主白粉菌有：羽翼草单囊壳(Sphaerotheca aphanis)、防己
叉丝壳(Microsphaera pseudolonicerae)、绣球钩丝壳(Uncinula hydrangeae)、山田
叉丝壳(Microsphaera yamadai)、卫矛钩丝壳(Uncinula sengokui)、三指叉丝单囊
壳(Podosphaera tridactyla)、十字花科白粉菌(Erysiphe cruciferarum)等 7 种。研
究表明白粉寄生孢在我国有较宽的寄主范围和丰富的生态多样性。
2 描述了不同来源白粉寄生孢的培养性状。结果表明白粉寄生孢在培养性状
的表型上存在较丰富的多态性，表现在菌落生长速度、质地、颜色变化、产孢量
及菌球的大小、颜色、数量等方面，其多态性与地理来源表现了一定的相关性。
3 对 27 株白粉寄生孢进行了致病力研究。运用科学统计法初次明确了白粉
寄生孢之间、寄主植物/白粉菌之间影响白粉寄生孢对白粉菌致病力大小的主次
效应，证明了当植物品种不同而白粉菌为同种时，植物品种间的显著差异和白粉
寄生孢与植物品种互作间的显著差异是造成白粉寄生孢致病力差异的主要效应；
当寄主植物和白粉菌均不同时，白粉寄生孢对白粉菌的致病力差异来自三者各自
之间的显著差异和它们互作间的显著差异。筛选出防治苹果、草莓、大花金鸡菊
白粉菌的生防潜力菌株：编号为 5144、5120、6097、6071。研究表明白粉寄生
孢对寄主植物/白粉菌没有严格的选择性，但有致病力强弱的划分。
有利于白粉寄生孢发挥生防潜力的条件为：温度 20~25℃；相对湿度 100%，
最好有水滴，保湿时间至少 3d；PSA 平板上 25℃培养不超过 90d；保证有一定
的接种量；混和菌株接种；发病初期接种；避免强光直射。
4 初次运用 ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)分子标记对来自我国部分省
市和英国、匈牙利共 60 株白粉寄生孢进行了分子指纹分析。结果如下：
I 建立了适于 ISSR-PCR 的白粉寄生孢基因组 DNA 的尿素快速提取法，建立
了稳定的 ISSR-PCR 分析的反应体系和程序。
II 试验证明白粉寄生孢中微卫星 SSR 是普遍存在的，白粉寄生孢种群内存
在着较高的遗传变异多态性，从 18 个引物中筛选出 5 个具有较高多态性的 ISSR
引物，共扩增出 45 条标记带，其中 43 条为多态性标记带，证实了有的 ISSR 引
物在某些真菌遗传多态性分析中具有较高的通用性。ISSR 分析法所构建的树状
图在遗传相似系数为 0.68 时将白粉寄生孢分为 7 个群(I、II、III、IV、V、VI、
VII)，遗传相似系数为 0.62 时分为 5 个群(A、B、C、D、E)。白粉寄生孢的 ISSR
多态性与致病力分化、培养性状的表型分化均表现了一定的相关性，而与其地理
来源密切相关。
Ⅲ ISSR 分子标记与 rDNA-ITS 序列分析在白粉寄生孢的遗传聚类图上非常
相似，并且 ISSR 分子标记可区分 ITS 序列完全相同的不同来源的白粉寄生孢各
菌株。ISSR 分子标记与 rDNA-ITS 序列分析相结合将是研究白粉寄生孢的系统
进化和遗传多态性的较理想工具。
关键词：白粉寄生孢；生态多样性；培养性状；致病力；ISSR 分子标记
目录
摘要 ....i
Abstract.........iii
第一章 前
言 ........... 1
1.1 白粉寄生孢的研究 ... 1
1.1.1 白粉寄生孢的分类 1
1.1.2 白粉寄生孢的寄主范围..... 3
1.1.3 白粉寄生孢的生态学效应. 4
1.1.4 白粉寄生孢在生防中的应用.......... 4
1.2 真核生物分类和遗传多样性研究中常用的几种分子标记..... 6
1.2.1 ISSR 技术的诞生及特点 .. 7
1.2.2 ISSR 技术用于检测遗传多样性和亲缘关系 ......... 8
1.2.3 ISSR 技术用于种质鉴定和遗传育种 ........ 9
1.2.4 ISSR 分子标记用于构建物种指纹库、遗传图谱和基因定位........ 9
1.3 研究的目的和意义 . 10
第二章 白粉寄生孢在国内部分地区的自然发生...... 12
2.1 材料与方法  12
2.1.1 样品采集. 12
2.1.2 显微观察. 12
2.1.3 白粉寄生孢的发生率和重寄生强度......... 12
2.1.4 统计分析 13
2.2 结果与分析  13
2.2.1 白粉寄生孢的寄主范围... 13
2.2.2 白粉寄生孢的发生率....... 13
2.2.3 白粉寄生孢的重寄生强度............ 17
2.3 结论与讨论.. 18
第三章 白粉寄生孢的培养性状 ....... 21
3.1 材料与方法  21
3.1.1 材料 ........ 21
3.1.2 培养方法. 22
3.2 结果与分析  22
3.2.1 白粉寄生孢在 PSA 培养基上的培养性状 ............ 22
3.2.2 白粉寄生孢在 PS 液体培养基中的培养性状 ....... 25
3.3 结论与讨论  26
第四章 白粉寄生孢对白粉菌的致病力研究. 27
4.1 材料与方法.. 27
4.1.1 试验材料. 27
4.1.2 试验方法. 29
4.2 结果与分析.. 31
4.2.1 白粉寄生孢对 3 个黄瓜品种感病叶片的致病力 . 31
4.2.2 27 株白粉寄生孢在苹果、草莓、大花金鸡菊白粉菌上的致病力研究 ... 34
4.2.3 白粉菌、白粉寄生孢菌龄对白粉寄生孢致病力的影响 .. 37
4.2.4 相对湿度及保湿时间对白粉寄生孢致病力的影响 .......... 40
4.2.5 温度白粉寄生孢致病力的影响.... 42
4.2.6 光照对白粉寄生孢致病力的影响 43
4.2.7 接种量对白粉寄生孢致病力的影响......... 43
4.2.8 混合菌株接种对白粉寄生孢致病力的影响.......... 44
4.2.9 大花金鸡菊不同叶面部位叶绿素含量的比较 ...... 45
4.3 结论与讨论.. 46
第五章白粉寄生孢的 ISSR 分子指纹分析.... 49
5.1 材料与方法.. 49
5.1.1 材料 ........ 49
5.1.2 方法 ........ 52
5.2 结果与分析 . 55
5.2.1 白粉寄生孢基因组 DNA 的提取 . 55
5.2.2 ISSR-PCR 最佳反应体系的确立. 56
5.2.3 ISSR 引物的筛选及 ISSR-PCR ... 57
5.2.4 ISSR 分子标记与 rDNA-ITS 序列分析法的比较  60
5.2.5 60 株白粉寄生孢 ISSR 多态性分析 ......... 63
5. 2. 6 白粉寄生孢 ISSR 多态性与致病力分化及表型多态性的相关分析........... 65
5.3 结论与讨论 . 66
5.3.1 白粉寄生孢基因组 DNA 的提取 . 66
5.3.2 ISSR 分子标记的稳定性和可行性分析 ... 66
5.3.3 ISSR 分子标记与 ITS 序列分析法的比较 ............ 67
5.3.4 ISSR 多态性与表型多态性和致病力分化的相关性............ 68
5.3.5 ISSR 多态性与白粉寄生孢遗传结构 ....... 69
参考文献 ...... 72
附录 . 79
致谢 . 92