渗漉法提取白芷总香豆素的工艺研究
渗漉法提取白芷总香豆素的工艺研究
【摘要】 目的优化渗漉法提取白芷香豆素的提取工艺。方法采用单因素和正交实验设计，以白芷总香豆素的含量为评价指标，对白芷香豆素类化合物进行渗漉提取。结果渗漉法提取总香豆素含量高达10.144 mg/g，其最佳工艺条件为：8倍量75%乙醇，浸泡8 h，渗漉速度0.5 ml/min。结论建立的数学模型和优化结果合理，渗漉法提取白芷香豆素可行。
【关键词】 渗漉法 白芷香豆素 欧前胡素
Abstract：ObjectiveTo optimize the percolation extract process for coumarins in Angelica dahurica .MethodsThe optimized extraction process was established by using single-factor and orthogonal, which was guided by the contents of total Coumarins.ResultsUnder the circumstance of optimized extraction process: 1:8 as the ratio of raw material to 75% ethylalcohol, 8h as dipping time, 0.5ml/min as the rate of percolation, the content of total Coumarins up to 10.144mg/g. ConclusionThe establish models and optimized parameters were proved to be reasonable and the percolation extract process of coumarins in Angelica dahurica was feasible.
Key words：Percolation extract method; Coumarins in Angelica dahurica; Imperatorin
白芷为伞形科当归属植物白芷Angelica dahurica（Fisch．ex Hoffm．）Benth．et Hook．f．或杭白芷A．dahurica (Fisch．ex Hoffm．) Benth.et Hook．F．var．formosana (Boiss．)Shan et Yuan的干燥根。其性温，气芳香，味辛、微苦，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用，被临床广泛应用于感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带和疮疡肿痛等症，并有较好的疗效［1］。白芷中总香豆素类为其镇痛的主要成分，又以欧前胡素、异欧前胡素和氧化前胡素为其中主要成分，其止痛效果已被充分肯定［2］。
为了进一步促进白芷香豆素的开发利用，对其有效成分的提取方法的研究是十分必要的。目前常用的白芷香豆素的提取方法以热回流法报道最多。该方法不仅加热时间过长，而且消耗溶剂多。而渗漉法除了具有操作简便、提取率高的优点以外，更重要的是，它可以避免香豆素成分受热损失。本文以白芷总香豆素为评价指标，通过单因素和正交实验设计，考察溶媒浓度、用量、浸泡时间和渗漉速度等因素对提取效果的影响，确定渗漉法提取白芷中香豆素类成分的最佳工艺条件,并将该工艺与超声波提取法、热回流法等进行了比较。
1 器材
1.1 仪器
752型紫外分光度计(上海光谱仪器有限公司)；SL500锈钢渗漉缺缺罐(衡阳市金山中药设备制造有限公司)；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHB-3循环式真空泵(郑州杜甫仪器厂)；HH-S数显恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)；ISO9001电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。
1.2 试剂甲醇、乙醇均为分析纯（成都科龙试剂厂）；95%医用酒精；欧前胡素对照品（购自中国药品生物制品检定所）。
1.3 药材
白芷Angelica dahurica（Fisch．ex Hoffm）Benth.et Hook．f购自成都市荷花池药材市场。
2 方法与结果
2.1 总香豆素含量测定
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称量欧前胡素对照品5.22 mg，置于100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制得0.052 2 mg/ml对照品溶液。
2.1.2 最佳测定波长的确定
将对照品和样品在200～400 nm处分别进行波长扫描,两者在300 nm处有吸收,而且峰形变化平缓,有利于含量测定，因此以300 nm作为测定波长。
2.1.3 标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，用甲醇定容至10 ml，以甲醇为空白，于300nm处测定吸光度。以浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标作图，得回归方程：A=47.4C+0.017(r=0.999 7,n=5)。结果表明，欧前胡素对照品溶液浓度在5.22～15.66 μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系。
2.1.4 供试品溶液的制备与含量测定
精密量取提取液5 ml，水浴挥干溶剂，加入甲醇溶解并定容至50 ml，摇匀，作为供试品溶液，稀释，以甲醇为空白，于300 nm处测定吸光度，并根据标准曲线计算白芷总香豆素含量。
2.2 提取工艺条件选择
2.2.1 提取溶媒考察
为正交设计因素水平设计提供初步依据，对水和醇两种溶媒进行考察。称取20 g白芷初粉（30目），分别用水和乙醇进行提取，提取液浓缩并定容至一定体积，按含量测定方法计算水提液和醇提液中总香豆素的含量。结果见表1。 表1 不同提取溶媒的比较（略）
实验结果表明，以乙醇作为提取溶剂，能提取较高含量的总香豆素，因此采用乙醇渗漉提取白芷总香豆素。
2.2.2 粒度考察
由于药材的粒度与有效成分的提取效果有关，因此，我们分别选择10，20，30目和40目的药材进行考察。以6倍量的95%乙醇，热回流提取3次，1 h/次为提取条件，分别进行提取，减压回收乙醇，将提取液浓缩至一定体积，总香豆素的含量选择适宜粒度的药材进行渗漉提取。结果见表2。表2 粒度的比较
上述结果表明，6倍量95%乙醇提取3次，1 h/次，粒度为20目时，白芷总香豆素含量为最大，因此，采用20目的药材进行下步工艺。
2.3 渗漉法提取白芷总香豆素工艺条件优化
2.3.1 因素水平设计在对提取溶媒和粒度考察的基础上，采用正交实验法，选用L9（34）正交表，以乙醇浓度、乙醇用量、浸泡时间、渗漉速度为因素，各因素分别设计3个水平。2.3.2 提取方法与结果
称取20 g白芷样品（20目），乙醇润湿2 h后装柱，用以上各条件进行实验，收集渗漉液，测定含量。结果见表4。表4 正交实验设计表及结果（略）
从直观分析结果表明，渗漉法提取白芷总香豆素的影响因素主次顺序为：A﹥B﹥C﹥D。方差分析结果表明，A因素的影响有显著意义P﹤0.05，故确定提取最佳工艺为：A1B3C1D3，即8倍量的75%乙醇，浸泡8 h后，以0.5 ml/min的速度渗漉为最佳提取方案。
2.3.3 渗漉法提取最佳工艺条件优化验证
称取20 g白芷样品（20目），选取以上渗漉法提取的最佳提取条件提取，测定总香豆素含量为10.047 mg/g。按优化工艺条件提取白芷香豆素，得到的总香豆素含量较高，因此可认为优化条件可行。
2.4 不同提取方法提取结果比较取白芷样品（20目）4份，每份约10 g，精密称定，以8倍量95%乙醇为溶剂，分别采用超声波提取法、热回流法、渗漉法，以及超临界CO2萃取（萃取条件温度50℃，压力30 MPa，萃取3.5 h，分离压力7.0 MPa）进行提取，提取液经过滤后定容至100 ml，测定总香豆素含量，结果见表6。表5 渗漉法提取香豆素方差分析（略）表6 不同提取方法的比较（略）
3 讨论
香豆素成分是白芷的主要活性成分，经实验证明，欧前胡素是白芷香豆素的基础成分之一，因此，本实验采用欧前胡素作为对照品，于300 nm处测定白芷总香豆素含量，并以此作为评价指标筛选最佳工艺，控制制剂质量是可行的。
溶媒考察时，本着以工业生产制剂为目的，考虑到经济、安全等因素，因此该实验仅对水和乙醇两种溶媒进行了考察。
在进行粒度考察时（见表2），20目和40目的白芷药材颗粒提取得到的总香豆素的含量差异不大，考虑到粉碎困难、节能降耗等因素，从生产的综合效益出发，选择20目的白芷药材进行提取。
经研究，白芷香豆素虽可溶于沸水，但其中欧前胡素易于发生Claisen烯丙基重排，生成别欧前胡素，即使在真空中加热也会引起这样的变化［3］，因此，虽然热回流法和渗漉法在提取效果上差别不大，但由于提取时间较长，温度较高，不利于香豆素类成分的提取。因此，采用乙醇渗漉法是可取的。该方法最佳工艺条件的确定为热不稳定性成分的提取提供了一个可借鉴的方法。
有文献报道渗漉法提取白芷香豆素的最佳乙醇浓度为50%［4］，因此，本实验在该浓度条件下渗漉提取。结果发现，50%乙醇渗漉提取得到的总香豆素含量仅为8.657 mg/g，不及75%乙醇的渗漉提取效果。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］．北京：化学工业出版社，2000：79..
［2］魏玉平，刘 俊，颜小林，等．白芷治疗头痛的提取工艺评判指标的研究［J］.中草药，2001，32(4)：318.
［3］姚新生．天然药物化学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1997：132.
［4］肖 丹，边燕红，马逾英，等．白芷配方颗粒的提取式艺研究［J］.中国中药杂志，2006，31（12）：1021.
