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硕士论文-猪附红细胞体体内外培养特性及胶乳凝集诊断方法的研究，共66页，39011字
摘要
本试验采用不同抗凝剂、培养基和培养条件探讨了影响猪附红细胞体体外培养的
因素，成功地进行了猪附红细胞体体外培养，连续培养达 96h 以上。同时，将猪附红
细胞体感染 SCID 鼠体，进行体内培养，获得较高水平的感染率，并表现部分临床症
状。分离体外培养的猪附红细胞体作为抗原，以新型免疫微球载体——胶乳为载体，
经羧化处理制备胶乳诊断试剂，建立胶乳凝集试验检测猪附红细胞体的血清抗体。初
步应用本法检测了 52 份样品，并与镜检法进行了比较。
研究结果表明：猪附红细胞体在肝素钠抗凝、5%CO2、高糖 RPMI-1640 或 HL 为基
础培养液添加 40%猪血清的完全培养基中均生长良好，HL 培养基的培养时间均较 1640
稍长，红细胞感染率与 1640 差异不显著。猪附红细胞体感染置换猪红细胞的 SCID
鼠 2 天后即可在末梢血液中检出该病原体，7～9d 红细胞感染率最高，高达 70%，最
长可以持续 28d。猪附红细胞体的培养时间可延长 48h 以上。制备的胶乳诊断抗原与
牛边缘无浆体、双芽巴贝斯虫、衣原体、猪瘟等阳性血清呈阴性反应，与猪附红细胞
体阳性血清、兔抗猪附红细胞体血清及感染地区血清样品呈阳性反应。胶乳凝集试验
与常规镜检法相比较，其灵敏度是镜检法的 1.11 倍，出现凝集结果的时间只需 3～
5min 且不需要仪器设备，表明 LAT 是一种快速诊断猪附红细胞体的方法，具有快速、
敏感、特异、操作简单的特点，适合猪附红细胞体病的流行病学调查。
关键词：猪附红细胞体；体外培养；SCID 鼠；胶乳凝集试验
目 录
目录……………………Ⅰ
摘要……………………Ⅶ
英文摘要………………Ⅷ
符号说明………………Ⅸ
前言………………………1
附红细胞体病研究现状3
1．病原学………………4
2．流行病学……………7
3．致病机理…………8
4．临床症状……………9
5．剖检特征……………10
6．诊断方法…………10
7．防治…………………13
试验内容………………15
1.猪附红细胞体体外培养研究…………………15
1.1 材料与方法…………15
1.1.1 材料………………15
1.1.2 方法………………17
1.2 结果与分析…………18
1.2.1 不同抗凝剂体外培养中红细胞平均感染率变化……………………18
1.2.2 不同血清体外培养中红细胞平均感染率变化………………………19
1.2.3 不同糖浓度培养基猪附红细胞体体外培养效果……………………20
1.2.4 不同培养基中红细胞感染率变化…………21
1.2.5 羊和兔红细胞体外培养染虫率变化……23
1.2.6 猪附红细胞体传代培养…………………24
1.3 讨论…………………24
1.4 小结…………………26
2.猪附红细胞体 SCID 鼠体内培养的研究…27
2.1 材料与方法…………27
2.1.1 材料……………27
2.1.2 方法……………28
2.2 结果与分析…………29
2.2.1 SCID 小鼠置换猪红细胞的观察…………29
2.2.2 自然菌株 SCID 鼠体内培养结果…………29
2.2.3 不同代次猪附红细胞体 SCID 鼠体内培养结果……………………30
2.2.4 SCID 体内培养的猪附红细胞体体外培养结果……………………30
2.2.5 SCID 鼠体内培养的猪附红细胞体动物试验结果………………30
2.3 讨论…………………30
2.4 小结……………32
3. 胶乳凝集试验诊断猪附红细细胞体血清抗体的研究…………………33
3.1 材料与方法………33
3.1.1 材料……………33
3.1.2 方法……………34
3.2 结果与分析……36
3.2.1 抗原蛋白含量测定结果…………………36
3.2.2 兔抗猪附红细胞体血清抗体效价测定…36
3.2.3 兔抗猪血清（阳性血清）与胶乳凝集诊断抗原特异性检验结果…37
3.2.4 最佳缓冲液 pH 值的确定…………………37
3.2.5 抗原蛋白最佳抗原浓度结果……………37
3.2.6 致敏胶乳自凝性检测结果………………38
3.2.7 致敏胶乳特异性的检测结果……………38
3.2.8 血清灭活处理对实验结果的影响………38
3.2.9 抗原保质期的测定结果…………………38
3.2.10 胶乳抗原最适反应温度的测定结果……39
3.2.11 初步临床应用结果………………………39
3.3 讨论………………40
3.4 小结………………42
结论 ………………43
参考文献………………44
附录……………………48
致谢 ………………52
导师组意见……………53
学位论文独创性声明及学位论文版权使用授权 ……………………54