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人源化抗CD146单克隆抗体的临床前转化研究——抗体中试规模标准化制备，博士学位论文，共69页，附答辩文稿。
摘 要
抗体药物以其靶向性强，比传统药物更加安全有效的特点，成为了近年来发展最快，并被人们寄予了最多期望的一类新型治疗剂。但是，由于抗体下游制备技术的限制，即使处于早期阶段的抗体药物开发者，也必须通过建立符合GMP标准的设施，才能实现适用于临床前研究的抗体药物规模化制备。而建造GMP设施的巨大投入，对于许多研究机构来说是难以承担的负担，也增加了抗体药物转化的成本和风险，限制了许多在实验室中表现出潜在应用价值的抗体进入临床前评估，成为了当前阻碍抗体药物转化研究进程的障碍之一。所以，对于处在早期开发阶段的研究者，如何更快捷地实现符合临床药物质量标准的抗体规模化制备，以完成各项临床前实验及安全性评价，成为了当前抗体药物转化研究中一个亟待解决的问题。
本论文围绕解决这一限速性关键问题，以抑制肿瘤血管生长的，人源化抗CD146单克隆抗体huAA98为切入点；进行了适用于临床前研究阶段的，非GMP条件下，抗体中试规模下游制备工艺的探索，获得了主要研究结果如下：
（1）建立了抗体huAA98的下游制备工艺。该工艺通过中空纤维微滤澄清、亲和层析、凝胶过滤层析、中空纤维超滤等四个环节，有效地去除了抗体huAA98培养上清中的各种杂质，稳定获得了纯度高于95%的抗体蛋白，满足了《中华人民共和国药典》（2010版）关于蛋白质药物纯度的要求。
（2）首次提出了“管路化制备”这一概念，发明了一种全封闭管路化抗体蛋白下游制备系统。我们通过将抗体药物下游制备过程所可能涉及的各工艺环节，分别构建成相对独立的全封密模块；然后按照目标抗体的制备工艺顺序，将相关模块进行顺序串连，构建成为无缝连接的管路化系统；进而通过在这一封闭无菌的系统中，完成抗体下游制备全部工序的方式，实现了在非GMP实验室环境中，制备符合临床药物质量标准抗体的目标。
（3）完成了多批次、规模逐级放大的抗体制备验证，达到了批次制备克级抗体蛋白的中试规模。质控结果表明，通过该系统获得的成品抗体huAA98，几项主要残留指标均显著低于《中华人民共和国药典》（2010版）的规定（内毒素﹤0.3 EU/ml，Protein A﹤100μg/ml，宿主蛋白﹤10μg/ml），符合临床药物质量标准；同时，也保持了良好的生物学活性。
综上所述，通过本论文研究，我们在实现治疗性人源化抗CD146单克隆抗体规模化制备的同时，提出了“管路化制备”这一适用于抗体药物早期开发阶段的新思路，创造了能够在非GMP环境下，规模化制备符合临床药物质量标准抗体的全封闭管路化系统。作为一项通用性平台技术，这种新方法在抗体药物早期开发中具有巨大的应用潜力；这项技术的发展和成熟，将会有力地推动抗体药物转化研究的进展。
关键词：抗体药物，转化研究，管路化制备，抗CD146单克隆抗体，临床药物质量标准

目 录
致 谢 I
摘 要 II
Abstract IV
目 录 VI
文献综述 1
抗体药物及其转化研究 1
1 抗体药物的发展历史 1
2 抗体药物的研究现状 2
3 抗体药物的发展趋势 9
4 靶向肿瘤血管治疗与CD146抗体 12
5 抗体药物的转化研究及相关关键技术发展 19
研究内容 28
CD146单克隆抗体中试规模标准化制备 28
概述 28
1 材料与方法 29
2 实验结果与讨论 35
3 结论 47
参考文献 49
作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 59