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识别糖表位单克隆抗体的制备、鉴定和抑瘤作用，博士学位论文，共85页，附答辩文稿。
摘 要
抗体的最大特征是其识别抗原的专一性，因此在肿瘤诊断和靶向治疗中发挥重要作用。然而，获得新功能抗体的关键是发现新靶分子，这一直是抗体研究领域的热点和难点。我们利用抗体差异筛选技术，用结肠癌细胞SW1116作为抗原免疫小鼠，通过正常/肿瘤组织差异筛选获得一株单克隆抗体，命名为3P9（IgM/κ）。本文主要介绍抗体3P9的制备、抗原决定簇鉴定及其抑瘤作用，获得主要结果如下：
（1）免疫组化检测323例肿瘤和正常组织，发现抗体3P9特异识别腺癌组织，如结肠癌，直肠癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌和食道癌，不识别分泌粘蛋白的正常组织；（2）用糖生物学方法和糖芯片研究3P9抗原，发现3P9抗体识别的抗原决定族是涎酸化二糖结构（sTn）；（3）体外细胞生物学实验表明，抗体3P9对sTn阳性结肠腺癌细胞的迁移具有明显的抑制作用，并且诱导靶细胞凋亡；（4）动物实验表明，抗体3P9能够抑制sTn阳性人结肠肿瘤的生长；（5）构建了3P9VH/κ小分子抗体，通过原核表达和复性，分析了小分子抗体的特异性和生物活性。
以上结果表明，抗体差异筛选肿瘤靶分子的策略是可行的，而且弥补了基因和蛋白质芯片的不足，最突出的优点是：（1）捕获的抗原能够保持其天然构象，避免了重组蛋白由于构像异常而造成的假阳性；（2）不仅能够捕获蛋白质抗原，而且还可以获得非蛋白类抗原，如糖类、脂类抗原。通过这种方法获得识别糖表位的肿瘤特异抗体3P9 有望应用于以下几个方面：(1) 腺癌的诊断和预后监测；(2) 人源化3P9 抗体有望用于结直肠癌的治疗；(3) 由于糖抗原免疫原性较低，研制抗3P9 独特型抗体可作为sTn 的内影像结构疫苗；(4) 作为一种新的研究工
具应用于肿瘤糖生物学研究。
在2003年刚进入实验室时，正值为遏制SARS重临寻找对应措施和加紧研制抗SARS药物和疫苗的关键阶段，作者参与了SARS的专项研究工作。主要贡献如下：(1) 从四例SARS恢复期患者的外周血分离淋巴细胞，构建针对SARS病毒的噬箘体人抗体库。库容量为1.83×106。通过免疫亲和筛选，获得两株特异识别SARS病毒的单链抗体，H12和B1。尽管这两株抗体都具有病毒中和作用，但它们识别的表位不同。通过抗原表位鉴定，我们发现单链抗体B1识别SARS病毒S2（ 1023-1189 ） ， 为线性表位（ Biochem Biophys Res Commun. 2005 Jul22;333:186-93）; 而单链抗体H12识别S1（12-672）二聚体，为构象依赖型表位（Antivir Ther. 2006;11:117-23）。 (2) 研究了光触媒钛网膜（PTAF）对SARS病毒的灭活作用，发现光触媒钛网膜能有效杀灭SARS活病毒，比普通羟基磷灰石网膜（HAT）的杀病毒作用强1000倍（生物学与生物物理进展, 2004，31: 982－985）。
关键词： 单克隆抗体3P9，糖链抗原sTn,，肿瘤生长抑制，噬菌体抗体库SARS冠状病毒