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硕士论文-山东省无花果种质资源遗传多样性评价及品种鉴定研究，共54页，28871字
摘 要
山东省作为我国无花果（Ficus carica L）早期主要传入地和栽培地区之一，已有一
百多年的栽培历史。特别是山东半岛一带，被称为我国无花果的沿海栽培中心。无花果
虽然以无性繁殖为主，但是不同环境条件下的繁衍盈升，也会造成种内变异的多样性。
而且，在很多地区都是庭院栽培，一些特殊的基因资源极有可能还未得到认识和利用。
所以，很有必要对分布地区的无花果资源进行勘察和搜集保存，展开其多样性研究，尤
其是对种质间的遗传差异从分子水平提供更为直接的证据，为进一步有效的开发利用奠
定基础。
本研究利用 RAPD（Random Amplification Polymorphism DNA）标记技术，对从山
东省境内不同地区搜集到的无花果资源的多样性进行了评估。并对与叶形相关的分子标
记进行了研究。另外，利用 RAPD 和 SSR（Simple Sequence Repeat）两种分子标记技术
构建部分无花果品种的 DNA 指纹图谱。
获得如下研究结果：
1. 通过对 8 个市近 20 个乡镇（社区）的考察搜集，共搜集无花果资源 66 份，现田
间保存资源 31 份共 55 株。
2. 通过 15 个随机引物在 58 份资源上的 RAPD 分析，将所搜集的资源分为 23 个不
同的基因型。随后又从 120 个随机引物中筛选出 28 个多态性高的引物，进一步对这 23
个基因型无花果进行 RAPD 多样性分析。共检测到 309 个清晰的位点，扩增片段范围在
200 bp～2500 bp 之间。其中多态性位点为 236 个，共有位点为 73 个，位点多态性比率
为 76.4%。利用 NTSYS-pc 分析软件分析了这 23 个基因型间的遗传相似系数。计算结果
表明，绝大多数基因型之间遗传相似性较高，但其中之一与其它基因型资源的相似系数
较低，可见其遗传背景比较特殊。利用 UPGMA 法构建了聚类树状图，当阈值为 0.760
时，可将 23 个基因型聚为五类。
3. 在对无花果的多样性进行分析的过程中，鉴定出两个与基部非心形/心形叶形相
连锁的标记：S20821640、S21041614。这两个标记经 SCAR 转化后，前者的多态性依然存
在，可作为资源鉴定的有效手段。而后者在不同叶形间的多态性消失，对于这一问题，
我们还会做进一步的研究。
4. 利用 RAPD 和 SSR 两种分子标记技术，对收集到的 11 个无花果品种的 DNA 指
纹进行了分析。经过 28 个随机引物的分析，最终区分出其中的三个品种，并将剩下的 8
个品种分为三组。其中，引物 S1259 的区分效率最高。通过 8 对 SSR 引物的扩增分析，
多态性较高的引物对 MFC1 和 MFC4 均能鉴定出其中的两个品种。将这两对引物扩增结
果结合分析，得到了与 RAPD 分析相同的鉴定结果。这一研究结果，将为无花果的品种
鉴定提供依据。
关键词：无花果；分子标记；遗传多样性；叶形标记；品种鉴定
目录
摘要............... ⅰ
Abstract........ ⅲ
英文缩写词表................. ⅴ
前言................. 1
材料与方法... 10
1 材料............ 10
2 方法............ 10
2.1 种质资源的搜集与保存............. 10
2.2 基因组 DNA 提取 .... 11
2.3 RAPD-PCR 扩增及产物鉴定 .... 12
2.4 RAPD 多样性数据统计与分析 . 12
2.5 RAPD 标记向 SCAR 标记的转换............... 12
2.5.1 琼脂糖凝胶上 RAPD 标记片段的回收 ... 12
2.5.2 重组质粒的构建.... 13
2.5.3 大肠杆菌 DH5α 感受态细胞的制备 ........ 13
2.5.4 重组质粒转化感受态细胞...... 13
2.5.5 提取质粒 DNA...... 14
2.5.6 重组质粒的酶切鉴定.............. 14
2.5.7 目的片段的测序.... 15
2.5.8 SCAR 引物设计及反应条件优化 ............ 15
2.6 无花果品种的 RAPD 指纹鉴定 15
2.7 无花果品种的 SSR 指纹鉴定.... 15
2.7.1 SSR 引物合成及 PCR 扩增 .... 15
2.7.2 SSR 扩增结果的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳.............. 15
结果与分析... 17
1 无花果种质资源的 RAPD 多样性分析 ......... 17
2 无花果叶形性状 RAPD 标记 ....... 18
3 RAPD 标记片段的回收、克隆及酶切鉴定 .. 19
4 特异片段的测序及分析................ 22
5 RAPD 向 SCAR 标记的转换........ 24
6 无花果品种 RAPD 指纹鉴定 ....... 25
7 无花果品种 SSR 指纹鉴定........... 27
讨
论........... 29
1 关于山东省无花果资源多样性问题.............. 29
2 关于无花果叶形标记的问题........ 30
3 关于无花果品种的指纹鉴定问题 31
结
论........... 33
参考文献....... 34
附录............... 38
致谢............... 42