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硕士论文-预冷与转BO-ACO2基因对青花菜乙烯生成及采后衰老影响的研究，共76页，41108字
摘 要
研究了预冷后青花菜早期乙烯生成特性和转 BO-ACO2 基因对青花菜采后花蕾自然
衰老过程中 ACC 氧化酶活性、BO-ACO2 基因的表达、乙烯生成及货架期的影响。并通
过分析转基因青花菜内源玉米素(ZR)、生长素(IAA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)水平
的变化，探讨了青花菜采后衰老过程中激素间的平衡调控作用，结果表明：
预冷后青花菜各组织 ACC 合成酶活性变化与乙烯释放变化曲线相类似。ACC 水平
从茎切伤面第一层到小花依次降低。MACC 以花头基部含量最低，小花中水平较高，但
变化平稳。ACC 氧化酶活性都呈上升趋势，茎组织明显低于小花。
转反义 BO-ACO2 基因推迟了青花菜 AI-1 花蕾黄化时间(3d)，降低了乙烯生成、呼
吸强度和 ACC 氧化酶活性，提高了叶绿素含量（对照的 1.97 倍），花蕾内源 IAA 和 ABA
含量明显低于对照，ZR 在衰老过程中一直呈上升趋势。转正义 BO-ACO2 基因也在一定
程度上推迟了青花菜 AII-1 花蕾黄化时间(12h)，降低了乙烯释放和 ACC 氧化酶活性，
叶绿素含量在采后 12h 有所增加，花蕾中 IAA 和 ABA 含量虽然低于对照，但高于 AI-1。
实时荧光定量 PCR 分析表明，转反义 BO-ACO2 基因推迟了 AI-1 花蕾内源 BO-ACO2
基因最高表达量的时间（比对照推迟 36h），最高表达量与对照最大表达量相近。转正义
BO-ACO2 基因抑制了 AII-1 花蕾内源 BO-ACO2 基因表达量，最大表达量不明显，不足
对照的 5%。
研究中观察到转 BO-ACO2 基因在影响青花菜乙烯生物合成特性的同时，对其生物
学也有影响，如生长发育比对照早 20d 左右，形态发生变异，移栽死亡率升高，育性和
结实率下降。
关键词：预冷； 转基因青花菜； BO-ACO2 基因； 乙烯； 内源激素； 衰老；
基因表达
目录
摘 要 ............I
Abstract...... II
英文缩写词 ....................IV
前 言 ........... 1
文献综述 ..... 2
1 乙烯生物合成与青花菜未成熟衰老的关系......... 2
1.1 青花菜未成熟衰老机理................. 2
1.2 乙烯的生物合成........ 2
1.3 青花菜上调控乙烯合成的两个关键酶.............. 2
1.3.1 ACC 合成酶 ............ 2
1.3.2 ACC 氧化酶 ............ 3
1.4 青花菜各组织器官的乙烯生成特性.................. 4
1.5 青花菜组织器官对乙烯的敏感性. 4
1.6 低温对青花菜衰老的影响............. 5
2 反义 ACC 氧化酶转基因研究进展 . 5
3 青花菜转基因研究进展.................... 6
4 转基因对植株表型性状的影响......... 8
5 转基因沉默................... 9
6 内源激素与衰老的关系.................. 10
6.1 乙烯与衰老的关系.. 10
6.2 细胞分裂素与衰老的关系........... 11
6.3 生长素与衰老的关系................... 11
6.4 赤霉素与衰老的关系................... 12
6.5 脱落酸与衰老的关系................... 12
第一章 预冷对青花菜早期乙烯生成特性的影响. 13
1 材料与方法................. 13
1.1 材料..... 13
1.2 处理..... 13
1.3 方法..... 14
1.3.1 乙烯含量的测定... 14
1.3.2 ACC 合成酶的提取与分析 ....... 14
1.3.3 ACC 和 MACC 的提取与分析. 14
1.3.4 ACC 氧化酶的提取与分析 ....... 14
2 结果与分析................. 16
2.1 乙烯生成的变化...... 16
2.2 ACC 合成酶活性变化 .................. 16
2.3 ACC 和 MACC 含量的变化........ 17
2.4 ACC 氧化酶活性变化 .................. 19
讨 论 ......... 20
小 结 ......... 21
第二章 转基因对青花菜采后衰老的效应分析..... 22
1 材料与方法................. 22
1.1 植物材料.................. 22
1.2 取样..... 22
1.3 测定指标和方法...... 22
1.3.1 外观颜色评分........ 22
1.3.2 叶绿素含量的测定.................... 22
1.3.3 呼吸速率的测定... 23
1.3.4 乙烯释放量的测定.................... 23
1.3.5 ACC 氧化酶活性测定 ............... 23
1.3.6 BO-ACO2 基因转录水平的测定.................... 23
1.3.7 转基因青花菜采后花蕾内源激素水平的测定.................. 26
1.3.8 转基因青花菜植株形态特征的评价............. 28
2 结果与分析................. 30
2.1 转 BO-ACO2 基因对花蕾颜色变化的影响..... 30
2.2 转 BO-ACO2 基因对青花菜花蕾叶绿素含量的影响.......... 30
2.3 转 BO-ACO2 基因对花蕾呼吸强度的影响..... 31
2.4 转 BO-ACO2 基因对花蕾乙烯释放量的影响. 32
2.5 转 BO-ACO2 基因对 ACC 氧化酶活性的影响 ................... 33
2.6 转基因青花菜 BO-ACO2 基因的表达分析..... 34
2.7 转基因青花菜花蕾内源激素含量的变化........ 38
2.7.1 细胞分裂素(ZR) .. 38
2.7.2 赤霉素(GA3)......... 38
2.7.3 生长素(IAA)......... 39
2.7.4 脱落酸(ABA) ....... 40
2.8 导入 BO-ACO2 基因对青花菜植株形态特征的影响.......... 41
2.9 转基因青花菜 T1 代自交种子外观评价 .......... 43
讨 论 ......... 44
1 转基因青花菜花蕾乙烯释放量与 ACC 氧化酶活性特性 ..... 44
2 转基因青花菜花蕾 BO-ACO2 基因的表达........ 44
3 转 BO-ACO2 基因对青花菜货架期的影响........ 46
4 转 BO-ACO2 基因对内源激素与衰老的影响.... 46
5 转基因对植株表型性状的影响...... 47
6 展望 ....... 48
小 结 ......... 49
图版 1 ........ 50
图版 2 ........ 51
图版 3 ........ 52
参考文献 ... 54
致 谢 ......... 62