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硕士论文-乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制及其毒素降解的研究，共61页，34147字
摘 要
黄曲霉毒素是现今发现的毒性和致癌性最强的天然污染物。黄曲霉毒素可造成
猪、鸡、鸭、火鸡、羊、牛等多种动物的急慢性中毒，使畜禽生产性能下降，抵抗
力降低，甚至死亡，并可在畜产品中残留，危害人体健康。本文在乳酸菌对寄生曲
霉生长的抑制及其毒素的生物降解方面进行了研究。本试验包括三部分。
试验一 乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制作用及其影响因素
将乳酸菌与寄生曲霉孢子同时接种于 MRS 培养液中 37℃培养，每隔 6h 取样，
直至 30h，28℃隔水式恒温培养箱培养，72h 后进行霉菌孢子萌发计数；每隔 3d 取
样，直至 12d，进行 AFB1 的测定。设置不同温度、酸碱度和乳酸菌浓度研究乳酸菌
抑制寄生曲霉生长的影响因素。结果显示植物乳酸杆菌组和保加利亚乳酸杆菌组
30h 时寄生霉菌孢子没有萌发，3-12d 内未检测到 AFB1，而对照组寄生霉菌孢子萌
发且检测到 AFB1。37℃，pH6.8，乳酸菌初始浓度为 107CFU/ml 时乳酸菌对寄生曲
霉生长的抑制作用最强。结果说明植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌在 MRS 液体
培养基中可抑制寄生曲霉的生长且乳酸菌对寄生曲霉生长的抑制作用与温度、酸碱
度和乳酸菌浓度有关。
试验二 乳酸菌对黄曲霉毒素 B1 的降解作用及其影响因素
分别将不同的乳酸菌培养液放入冷冻离心机 4℃ 10000r/min 离心。 弃去上清
液，向沉淀的乳酸菌细胞中加入灭菌的生理盐水，轻轻吹打悬浮，加入 10μlAFB1。
将混有 AFB1 的乳酸菌细胞悬液在 37℃，180r/min 振荡条件下培养 120 min。 冷冻
离心机 4℃以 10000r/min 离心 10 min，取出上清液，并向沉淀中加入 10ml 生理盐
水并重复离心 2 次，合并上清液，按 ELISA 法测定离心所得上清液中 AFB1 的量。
设置不同温度、作用时间、乳酸菌浓度和乳酸菌活性研究乳酸菌对黄曲霉毒素 B1
吸附作用的影响因素。结果显示植物乳酸杆菌、保加利亚乳酸杆菌、干酪乳杆菌干
酪亚种和鼠李糖乳酸杆菌对 AFB1 均有不同程度的吸附作用，其中鼠李糖乳杆菌的
吸附率最高达 64.8%。乳酸菌对 AFB1 的吸附作用与温度、作用时间、乳酸菌活性无
关；而与乳酸菌的浓度有关，浓度越高，乳酸菌的吸附作用越强。
试验三 乳酸菌对饲料中寄生曲霉生长抑制作用的研究
鸡饲料进行高压灭菌，将寄生曲霉孢子悬液和乳酸菌培养液均匀喷洒于饲料中
发酵 10d 保持含水量在 20%左右，同时维持培养基中正常的含氧量。试验结束后将
发酵过的饲料分装到袋中，经高压灭菌后晒干、混合，最后密封保存待测。结果显
示加入植物乳酸杆菌的饲料未见寄生曲霉孢子萌发且没检测到 AFB1，而加入保加利
亚乳酸杆菌和对照组的饲料寄生曲霉孢子萌发且检测到 AFB1。结果表明植物乳酸杆
菌可抑制饲料中寄生曲霉生长和产毒，而保加利亚乳酸杆菌对饲料中的寄生曲霉生
长几乎没有抑制作用。
关键词：寄生曲霉孢子；乳酸菌；黄曲霉毒素 B1；抑制作用；吸附作用
目录
中文摘要............... i
英文摘要............. iii
缩略符号.............. v
文献综述.............. 1
1 前言 ................ 1
2 产生黄曲霉毒素菌群的接种和无性繁殖 .......... 1
2.1 产黄曲霉毒素真菌的种类和接种源 ............... 1
2.2 影响黄曲霉菌群接种和繁殖的因素 ............... 2
3 黄曲霉毒素的性质和毒性作用 ........ 4
3.1 黄曲霉毒素的化学结构和理化性质 ............... 4
3.2 黄曲霉毒素的毒性作用 ................. 5
4 饲料霉菌毒素的脱毒方法 ................ 6
4.1 机械脱毒 ..... 6
4.2 物理脱毒 ..... 6
4.3 化学脱毒 ..... 8
4.4 酶制剂 ......... 8
4.5 营养解毒法 . 8
5 黄曲霉毒素检测方法 ...... 8
5.1 薄层色谱法（TLC 法）................. 9
5.2 免疫化学 ..... 9
试验一 乳酸菌对寄生曲霉生长和产毒的抑制作用及影响因素 .......... 12
1 试验材料 ...... 12
1.1 培养基 ....... 12
1.2 菌种 ........... 12
1.3 试剂 ........... 12
1.4 仪器 ........... 13
2 试验方法 ...... 13
2.1 寄生曲霉孢子悬液的制备 ........... 13
2.2 植物乳酸杆菌活化培养和活菌计数 ............. 13
2.3 保加利亚乳酸杆菌分离培养和活菌计数 ..... 14
2.4 植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌对寄生曲霉孢子活性影响 ..... 14
2.5 植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌抑制寄生曲霉产毒 ................. 14
2.6 温度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性影响 . 14
2.7 培养基初始 pH 对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性影响 15
2.8 乳酸菌初始浓度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性影响 ................. 15
3 结果 .............. 15
3.1 试验组培养不同时间寄生曲霉孢子活性 ..... 15
3.2 试验组培养不同时间 AFB1 含量. 16
3.3 温度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性影响 . 17
3.4 pH 对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响 ............... 20
3.5 乳酸菌初始浓度对乳酸菌抑制寄生曲霉孢子活性的影响 ............. 22
4 讨论 .............. 23
试验二 乳酸菌对黄曲霉毒素 B1 的降解作用及影响因素 .. 25
1 试验材料 ...... 25
1.1 培养基 ....... 25
1.2 菌种 ........... 25
1.3 试剂 ........... 25
1.4 仪器设备 ... 26
2 试验方法 ...... 26
2.1 菌种的恢复培养 ......... 26
2.2 乳酸菌的活菌计数 ..... 26
2.3 乳酸菌对 AFB1 的吸附作用......... 26
2.4 时间对乳酸菌吸附 AFB1 的影响. 27
2.5 温度对乳酸菌吸附 AFB1 的影响. 27
2.6 乳酸菌活性对乳酸菌吸附 AFB1 的影响....... 27
2.7 乳酸菌浓度对乳酸菌吸附 AFB1 的影响....... 28
2.8 ELISA 法测定 AFB1 的含量 ......... 28
3 结果 .............. 29
3.1 乳酸菌对 AFB1 的吸附强度.......... 29
3.2 时间对乳酸菌吸附 AFB1 的影响. 29
3.3 温度对乳酸菌吸附 AFB1 的影响. 31
3.4 乳酸菌活性对乳酸菌吸附 AFB1 的影响....... 31
3.5 乳酸菌浓度对乳酸菌吸附 AFB1 的影响....... 32
4 讨论 .............. 33
试验三 乳酸菌对饲料中寄生曲霉生长和产毒影响的研究 35
1 试验材料 ...... 35
1.1 培养基 ....... 35
1.2 菌种 ........... 35
1.3 试剂 ........... 35
1.4 主要仪器 ... 35
2 试验方法 ...... 36
2.1 寄生曲霉孢子悬液的制备 ........... 36
2.2 发酵试验 ... 36
2.3 AFB1 的提取................. 36
2.4 ELISA 法测定 AFB1 的含量 ......... 36
3 结果 .............. 37
3.1 10d 不同试验组发酵情况 ............. 37
3.2 不同试验组 AFB1 的含量............. 37
4 讨论 .............. 38
结论....... 39
参考文献....... 40
附录....... 43
致谢....... 44
攻读硕士学位期间发表的学术论文 ................. 45