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硕士论文-降胆固醇乳酸菌体外筛选条件优化的研究，共63页，35128字
摘 要
乳酸菌对人体的益生效果已经得到人们的普遍认可，随着社会发展和科研
的进步，针对现在社会的高血脂人群的不断增加，乳酸菌的降胆固醇特性成为
乳酸菌界研究的热点，并取得了很大的进展。由于乳酸菌降胆固醇的机理及其
复杂，因此乳酸菌降胆固醇体外筛选方法一直是评价乳酸菌降胆固醇效果的有
效筛选方法。
本实验以 10 株乳酸菌为研究对象，从三方面对降胆固醇乳酸菌体外筛选中
存在的问题进行了研究探讨，（1）降胆固醇乳酸菌体外筛选培养基对筛选结果
的影响:对三种现在研究中用到的高胆固醇培养基蛋黄-MRS、胆固醇胶束溶液
-MRS 和乙醇胆固醇溶液-MRS 培养基的体外筛选效果进行了比较，并对筛选效果
较好的培养基的配制方法进行了探讨；（2）乳酸菌培养时间对其降胆固醇能力
的影响:主要探讨了乳酸菌的降胆固醇特性与发酵时间的关系，重点比较了处于
稳定期和对数生长期的乳酸菌体外降胆固醇效果的不同；（3）体外筛选培养基
中胆固醇快速测定方法探讨研究：参考血液中胆固醇的测定方法，探讨了磷铁
硫法、邻苯二甲醛直接显色法和硫酸铁铵显色法测定培养基中胆固醇含量的效
果，并与常用到的皂化提取邻苯二甲醛显色法进行了比较。主要研究结果如下：
（1）10 株乳酸菌在蛋黄-MRS、胆固醇胶束溶液-MRS 和乙醇胆固醇溶液-MRS
培养基中均表现出降胆固醇特性，但是在三种培养基中的降胆固醇能力高低顺
序不完全相同，有的株菌差异显著；相比较而言胆固醇胶束溶液-MRS 培养基有
较好的筛选效果；胆固醇胶束配制最佳方法为：0.1g 胆固醇，0.2g 胆盐,0.1g
蔗糖酯充分混匀，加入 1mL 吐温 80 充分混匀，再加入 3mL 冰乙酸，混匀后水浴
70℃加热至充分溶解，然后超声乳化 15min,即得到均匀的胆固醇胶束溶液。
（2）乳酸菌的降胆固醇能力并不都是随着发酵时间的延长呈现规律性增加
趋势的；乳酸菌在高胆固醇培养基中生长 10h 就能表现出明显的降胆固醇特性；
对数生长期的乳酸菌比稳定期的乳酸菌降胆固醇能力稍高；用乳酸菌的胆固醇
去除效力评价乳酸菌的降胆固醇能力比用胆固醇去除率更具有参考价值。
（3）乳酸菌在胆固醇胶束-MRS 培养基中培养 10h，采用改良的非皂化硫
酸铁铵法或者磷铁硫法可以实现体外降胆固醇乳酸菌大批量样本的初筛。
关键词：乳酸菌；降胆固醇；体外筛选
目 录
中文摘要 ......I
英文摘要 .....II
英文缩略词表 .. IV
前 言 .... 1
1.1 乳酸菌降胆固醇作用研究进展.... 1
1.1.1 乳酸菌体外降胆固醇实验研究进展...... 1
1.1.2 降胆固醇乳酸菌动物喂养及人体实验研究进展 4
1.2 乳酸菌降胆固醇作用机制的研究 5
1.3 立题依据及意义..... 10
第一章 降胆固醇乳酸菌筛选培养基的研究 . 12
1.1 材料与方法...... 12
1.1.1 材料 ...... 12
1.1.2 方法 ...... 14
1.2 结果与分析...... 16
1.2.1 胆固醇浓度标准曲线 16
1.2.2 乳酸菌发酵三种高胆固醇培养基 pH 值的变化 16
1.2.3 乳酸菌在不同培养基中的生长情况.... 17
1.2.4 乳酸菌在三种培养基中的胆固醇降低率.... 18
1.2.5 胆固醇胶束溶液配制方法的优化.. 19
1.3 讨论 ... 21
第二章 乳酸菌发酵时间对其降胆固醇能力的影响 ... 23
2.1 材料与方法...... 23
2.1.1 材料 ...... 23
2.1.2 方法 ...... 24
2.2 结果与分析...... 25
2.2.1 乳酸菌在高胆固醇培养基中的生长曲线... 25
2.2.2 乳酸菌降低胆固醇特性与发酵时间的关系...... 25
2.2.3 乳酸菌发酵时间与发酵产酸的关系.... 26
2.2.4 乳酸菌不同生长期的胆固醇降低情况 27
2.2.5 乳酸菌胆固醇降低率与基质 pH 值变化的关系 28
2.2.6 乳酸菌体外降胆固醇能力评价..... 30
2.3 讨论 ... 32
第三章 降胆固醇乳酸菌体外初筛方法的优化 .... 34
3.1 材料与方法...... 34
3.1.1 材料 ...... 34
3.1.2 方法 ...... 35
3.2 结果与分析...... 37
3.2.1 不同方法测定的胆固醇浓度标准曲线 38
3.2.2 非皂化直接显色方法的胆固醇回收率比较...... 39
3.2.3 三种显色方法筛选结果的比较..... 40
3.2.4 三种直接显色方法与皂化提取显色法筛选结果比较 .... 40
3.3 讨论 ... 42
第四章 主要结论与展望 ..... 43
4.1 主要结论... 43
4.2 下一步研究工作及展望 43
参考文献 ... 45
致 谢 .. 49