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毕业论文-空气中病毒高灵敏度采样器的开发，共32页，14582字
摘要
SARS病毒、禽流感病毒、甲型流感病毒等病毒引起的重大疫情的爆发，使人类深刻地认识到病毒传染给人类健康带来的威胁。实时检测空气环境中的致病病毒，对传染病监控、流行病学研究、病原体分离鉴定等都有重要的意义。目前，国内外相关研究主要集中于从流行病学方面讨论病毒气溶胶对人体可能造成的危害，而实时检测空气中病毒及空气中病毒采集器的开发等方面的报道较少。
通过设计运行程序和采样装置，开发了一种便携高效的病毒采样器。运行程序采用单片机自动化控制，可实时显示采样速度、预置空气采样量和剩余空气采样量。采样装置采用鼓泡式吸附，极大地增加了吸附剂与病毒气溶胶的接触面积，并选用能有效吸附病毒的阴离子交换树脂作为吸附剂。另外，设计出操作方便快捷的采样筒装置，实现了吸附、洗脱一体化。
查找出H1N1病毒和H5N1的保守序列并设计引物。对公交车、医院候诊室采集的样品进行荧光定量PCR检测，分别检测到的H1N1病毒浓度为5.60×103个/L、2.20×104个/L；H5N1病毒浓度为1.18×104个/L、2.51×104个/L。结果表明，自行设计的病毒采样器能成功采集病毒，且用定量PCR方法检测所采集的病毒具有较高灵敏度。
关键词：病毒气溶胶，采样器，鼓泡式，保守序列，荧光定量PCR

目录
第一章 绪论 1
1.1 病毒气溶胶简介 1
1.2 病毒气溶胶采样技术研究现状 1
1.2.1 采样方法与仪器 2
1.2.1.1 撞击法(Impaction) 2
1.2.1.2 离心法(Centrifugation) 2
1.2.1.3 气旋法(Cyclone scrubbing) 2
1.2.1.4 冲击法(Impingement) 3
1.2.1.5 过滤法(Filtration) 3
1.2.1.6 静电沉降法(Electrostatic Precepitation) 3
1.2.1.7 生物类采样法 3
1.2.2 采样介质 4
1.3 病毒检测方法研究现状 4
1.3.1传统检测方法 4
1.3.1.1 细胞培养法 4
1.3.1.2 免疫学方法 4
1.3.2 分子生物学方法 5
1.3.2.1 实时荧光定量PCR 5
1.3.2.2 巢式或半巢式PCR 5
1.3.2.3 基因芯片技术 5
1.3.3 其它方法 5
1.4 课题目的与课题意义 6
第二章 采样装置设计及采样液优化 7
2.1 工作原理 7
2.2 装置设计 7
2.2.1 内部结构设计 7
2.2.1.1 电路设计 8
2.2.1.2 软件设计 9
2.2.3 外部结构设计 9
2.3 采样液优化 10
2.3.1 壳聚糖纳米颗粒的制备 10
2.3.2 壳聚糖纳米颗粒和阴离子交换树脂对DNA吸附效果比较 11
2.3.1 DEAE阴离子交换树脂吸附DNA和RNA后碱洗脱效果 12
第三章 病毒采样与检测 13
3.1 实验材料 13
3.1.1 采样装置及采样介质 13
3.1.2 质粒 13
3.1.3 主要试剂 13
3.1.4 实验仪器及设备 13
3.2 实验方法 14
3.2.1 待测病毒保守序列的查找 14
3.2.2 引物设计 14
3.2.3 空气病毒实地采样 15
3.2.4 病毒RNA提取 15
3.2.4.1 准备工作 15
3.2.4.1 病毒RNA的提取 15
3.2.5 逆转录 16
3.2.6 病毒检测 16
3.2.6.1 标准曲线绘制 16
3.2.6.2 RT-PCR检测病毒 16
3.2.6.2 凝胶电泳检测目的片段 17
第四章 结果与讨论 18
4.1 仪器装置制做成果 18
4.2 病毒实地采样效果检测 19
4.2.1 荧光定量PCR标准曲线 19
4.2.2 不同地点采样结果荧光定量PCR检测 19
4.2.3 H1N1和H5N1凝胶电泳检测 21
结论与展望 23
结论 23
展望 23
致谢 24
参考文献 25