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硕士论文-硝普钠、NG-硝基-左旋精氨酸甲酯和pH对肉鸡胫骨生长板软骨细胞生长分化的影响，共69页，39688字
摘要
试验一
不同剂量的 SNP 和 L-NAME 对肉鸡胫骨生长板软骨细胞增殖、代谢及 NOSmRNA
表达的影响
选 21 日龄肉鸡生长板软骨细胞进行体外培养，在第二代软骨细胞培养液中加入
不同剂量的 SNP（0.5、1、2mg/ml）和不同剂量的 L-NAME（0.5、2、8mg/ml），研究
SNP 和 L-NAME 对生长板软骨细胞发育和代谢的影响。结果表明：添加 SNP 后，细胞
增殖速度受到抑制，生长明显慢于对照组，添加 L-NAME 后，细胞生长速度明显加快，
并且提前进入快速生长期。SNP 使胶原含量略有下降，胶原酶活性上升，而 L-NAME
使胶原的含量明显上升（P<0.05）；胶原酶活性下降；添加 L-NAME 的各组蛋白多糖
含量普遍高于对照组，并且随 L-NAME 的浓度的增加而逐渐增加（P<0.05）。
SNP 和 L-NAME 主要是改变了细胞培养液中 NO 的浓度，NO 浓度上升，细胞增殖
速度明显变慢；NO 浓度下降，细胞明显表现出增殖加快，表明 NO 对软骨细胞的增
殖起重要的调控作用。bFGF 也使生长板软骨细胞数量增殖速率加快，同时培养基质
中 NO 水平显著降低，表明 bFGF 的作用也是通过 NO 介导的。硝普钠使生长板软骨
细胞培养基质中胶原含量降低、胶原酶活性提高、糖醛酸含量降低；而 L-NAME 相
反，表明 NO 对生长板软骨细胞的代谢产生重要的影响。
试验二 不同 pH 对肉鸡胫骨生长板软骨细胞增殖、代谢的影响
选 21 日龄肉鸡生长板软骨细胞进行体外培养，调整第二代软骨细胞培养液中的
pH 值（7.0、7.3、7.6、7.9），研究不同 pH 值对胫骨生长板软骨细胞发育和代谢的
影响。试验结果表明：PH7.3 组细胞长势最好，第 3 天进入增殖期，第 5 天开始进入
对数生长期；pH7.6 组长势稍缓，第 4 天开始进入增殖期，细胞数量也比 pH7.3 的组
略少；pH7.0 组长势缓慢，第 4 天才开始呈现增长势头，第 5 天进入增殖期。pH7.9
的组，生长曲线与 pH7.0 组类似，但细胞数量比 pH7.0 组略多。pH7.0 组 NO 浓度显
著高于其余各组（P<0.05），pH7.6 组 NO 浓度显著低于其余各组（P<0.05）。pH7.6
组胶原含量高于 pH7.0 组（P<0.05），同时 pH7.6 胶原酶的活性低于 pH7.0 组和 pH7.3
组（P<0.05）， pH7.0 组的糖醛酸含量低于其他组。
pH 偏低或偏高均会抑制生长板软骨细胞的增殖。pH7.0 组培养基质中的 NO 浓
度显著高于其他组，pH 偏低有可能是通过 NO 介导抑制生长板软骨细胞增殖的。在
pH 值 7.0 时，培养基质中的 NO 浓度升高、胶原、糖醛酸含量降低、胶原酶活性提
高；在 pH 值 7.6 时培养基质中的 NO 浓度降低、胶原、糖醛酸含量提高、胶原酶活
性降低。表明培养基质中 pH 的变化对软骨细胞代谢的影响，NO 可能起到重要的介
导作用。
试验三 SNP 与 L-NAME 对肉鸡胫骨生长板软骨代谢、生长及血液生化指标的影响
选 250 只 1 日龄健康的 AA 肉用雏鸡，研究在饲喂高磷（0.2mol/kg（NH4）3PO4）
高氯（0.2mol/kg NH4Cl）日粮下，加入不同剂量的 SNP（0.5、1.5、3mg/kg·BW）和
不同剂量的 L-NAME（5、15、45mg/kg·BW），研究 SNP 和 L-NAME 对肉鸡血液中阴阳
离子、酸碱平衡，胫骨软骨发育不良发生率、软骨基质组分的影响，以及对 NOS 活
性的作用。结果表明：随 L-NAME 浓度的增加，TD 发病率呈上升趋势。血液 PH 值与
阳性对照组相比有所上升，碱贮和碱超含量有所上升，说明 L-NAME 在一定程度上能
碱化血液。同时检测到血浆和胫骨中 NO 的浓度均显著降低（P<0.05），软骨基质内
胶原、糖醛酸含量上升、胶原酶活性下降。添加 SNP 后发现血浆和胫骨中 NO 的浓度
均显著提高，软骨基质内胶原、糖醛酸含量下降、胶原酶活性上升。阳性对照组 TD
发生率上升，检测发现磷酸根离子浓度显著增高（P<0.05），氯离子变化不明显，血
液 PH 值下降，血液和软骨中 NO 浓度降低。TD 病鸡和健康鸡各项指标的对比发现，
TD 病鸡生长板厚度增加，病鸡血液和胫骨中 NO 浓度、NOS 的活性均显著低于正常
组（P<0.05），TD 病鸡软骨基质中胶原、糖醛酸含量增加、胶原酶活性下降。
SNP 和 L-NAME 改变了体内 NO 的浓度，影响到生长板软骨组织内胶原、糖醛酸
含量，胶原酶的活性。TD 病鸡与健康鸡各项检测指标证明在发生 TD 时，NO 含量减
少，进而导致软骨细胞大量增生，胶原，蛋白多糖含量上升，形成软骨团。
关键词：肉鸡，胫骨软骨发育不良，一氧化氮，硝普钠，NG-硝基-左旋精氨酸甲酯，
pH，胶原，糖醛酸
目录
第一章
绪论 1
第一节 肉鸡胫骨生长板的生理生化特性…1
1 生长板的基本组分………1
2 生长板的血液供给……………1
3 生长板软骨降解代谢和影响因素………1
第二节 胫骨软骨发育不良概述……………3
1 症状学 ………4
2 病理学…4
3 生化变化 ……4
4 病因学 ………5
5 发病机理 …… 6
第三节 NO 与软骨代谢………8
1 NO 的生物学特性…………8
2 NO 对软骨代谢的影响…… 9
第四节 胫骨软骨发育不良发病机理的研究展望 ………11
第二章
不同剂量的 SNP 和 L-NAME 对肉鸡胫骨生长板软骨细胞增殖、
代谢及 NOSmRNA 表达的影响 ……12
1 材料与方法………12
2 结 果
3 讨 论……………18
……21
4 小 结 …… 23
莱阳农学院硕士论文
第三章 不同 pH 对肉鸡胫骨生长板软骨细胞增殖、代谢的影响…… 24
1 材料与方法 24
2 结 果 ………26
3 讨 论 ………28
4 小 结 ………29
第四章 SNP 与 L-NAME 对肉鸡胫骨生长板软骨代谢、生长及血液
生化指标的影响… 30
1 材料与方法…………30
2 结 果 ………33
3 讨 论 ………40
4 小 结 ………44
第五章 结论 46
致 谢……… 47
参考文献 ……48