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硕士论文-鸭瘟病毒的分离鉴定，共46页，29411字
摘 要
本实验通过鸭胚尿囊腔接种，对从山东采集的疑似鸭瘟的病鸭肝组织进行了
病毒分离，获得病毒分离株。接种鸭胚，收集死亡鸭胚液进行了病毒的负染、电
镜观察。经形态学、理化特性、生物学特性、致病性、抗原性和分子生物学特性
测定表明该病毒为不耐酸、不耐碱、不耐热、对氯仿处理敏感、核酸类型为双股
DNA 的有囊膜病毒，直径为 120-200nm。
此分离株对 10 日龄鸭胚的致死率为 100%，人工感染 15 日龄雏鸭的致死率
为 100%。不同品种、不同日龄患该病病死鸭的肉眼病变基本一致，主要表现为
肝脏、胰脏、脾脏、肾脏和肠道粘膜出血。通过人工感染雏鸭可成功复制出与自
然感染病例相同或相近的肉眼病变及组织学病变。
此外，本实验用鸭胚成纤维细胞培养了该病毒，并详细观察了此病毒引起的
细胞病变。
临床上，可根据该病的典型临床症状和剖检病变做出初步诊断。本试验建立
了 PCR 诊断方法，目的片段大小为 228bp，为临床上快速诊断鸭瘟提供了一种检
测方法。
关键词：鸭瘟病毒
分离鉴定
聚合酶链式反应（PCR）
目录
中文摘要 1
英文摘要 2
缩写词表 3
文献综述 4
试验一 疑似鸭瘟病毒的分离培养 …………………18
1 材料与方法 …………………18
1.1 材料18
1.2 方法18
1.2.1 病料处理………………18
1.2.2 鸭胚的接种与传代……19
1.2.3 鸭胚成纤维细胞的培养与接毒………………19
1.2.4 病毒的电镜观察………20
1.2.5 动物回归实验…………20
1.2.6 兔抗疑似鸭瘟抗血清的制备…………………20
2 结果 …………………21
2.1 鸭胚的接种与传代………21
2.2 鸭胚成纤维细胞的培养及接毒…………………22
2.3 电镜观察…………………23
2.4 动物回归实验……………23
2.5 疑似鸭瘟病毒抗血清的制备……………………26
3 讨论…26
试验二 疑似鸭瘟病毒的生物学特性 ………………27
1 材料与方法 …………………27
1.1 材料27
1.2 方法27
1.2.1 鸭胚半数致死量的测定27
1.2.2 对不同动物红细胞的血凝性…………………27
1.2.3 氯仿的敏感性试验………27
1.2.4 酸敏感性试验……………28
1.2.5 热灭活试验………………28
1.2.6 血清交叉定性中和试验…28
2 结果 ……………………28
2.1 疑似鸭瘟病毒ELD50的测定…28
2.2 对不同细胞的血凝性………29
2.3 氯仿的敏感性试验…………30
2.4 酸敏感试验…………………30
2.5 热灭活试验…………………30
2.6 血清交叉定性中和试验……30
3 讨论……30
试验三 PCR 技术诊断鸭瘟病毒 31
1 材料与方法 ……………………31
1.1 材料…31
1.2 方法…32
1.2.1 引物设计…………………32
1.2.2 鸭瘟病毒基因组的提取…32
1.2.3 PCR 扩增特异性片断……32
1.2.4 扩增出的特异性片断的回收……………………33
2 结果 ……………………33
2.1 228BP 特异性片断的扩增… 34
2.2 测序结果……………………34
3 讨论……35
结论……35
参考文献…36
致谢
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攻读硕士期间发表的论文