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硕士论文-鸭瘟病毒AV1221株UL24基因的克隆与原核表达，共51页，24365字
摘 要
将鸭瘟强毒 AV1221 株一百倍稀释，接种 12 日龄鸭胚绒毛尿囊腔，增殖病毒。根
据 GenBank 中已发表鸭瘟弱毒株序列，设计合成四条引物，以病毒 DNA 为模板，用 PCR
方法，分段扩增 UL24-TK（414bp）、UL24-25（1813bp）基因片段，并用巢式 PCR 进
行目的 DNA 的筛选。将扩增得到的基因克隆到 pMD18-T 载体上，经蓝白斑和 PCR 鉴
定筛选出阳性克隆进行序列测定，用生物学软件将所测序列进行编辑，然后将其与弱毒
序列和其它 α-疱疹病毒进行比较。结果显示：鸭瘟病毒 AV1221 株 UL24 基因 ORF 全
长为 1230bp，编码 409 个氨基酸，与参考序列比较，核苷酸同源性为 99.8%，有三个核
苷酸位点发生变异，氨基酸的同源性为 99.8%，仅有一个核苷酸位点发生变异，与禽疱
疹病毒的亲缘性较近。上述结果表明，UL24 基因在不同毒株间高度保守。
用生物学软件分析 UL24 蛋白的抗原性选取其中一段抗原性较好的区域，命名为
UL24-1，重新设计一对引物，引物两端有 EcoliⅠ和 HindⅢ酶切位点，采用 PCR 方法克
隆该片段。将所得的片断插入 pET-32a(+)载体，构建重组质粒，重组质粒经 PCR 和酶切
鉴定为阳性后，转化入宿主菌 Ecoli BL21。IPTG 诱导表达，经 SDS-PAGE 分析表明，
在 33KD 处出现了与预期大小相符的目的条带。对表达蛋白做可溶性分析，证实该蛋白
主要以包涵体形式存在。
关键词：鸭瘟病毒；UL24 基因；PCR；原核表达
目 录
中文摘要……Ⅰ
英文摘要……… ………… … …… …… Ⅱ
缩略符号 ………… ………… …… ……Ⅲ
前言 1
1.立体依据及意义 … … … … … … … … … … 1
2.文献综述 … … … … … … … … … … … 1
2.1 病 原学研究进展 … … … … … … 1
2.2 检测技术研究进展 … … … … … … … 5
2.3 疫苗研制 … … … …… … … … 7
试验部分 … …… … … …… … … 9
1. 鸭瘟病毒 AV1221 株 UL24 基因的克隆及序列分析…9
1.1 材料 ……9
1.2 方法 ……9
1.3 结果与分析……… …15
1.4 讨论……21
2. 鸭瘟病毒 AV1221 株 UL24 基因片断的原核表达……23
2.1 材料……23
2.2 方法……23
2.3 结果与分析……… …28
2.4 讨论……31
结论…………33
参考文献……34
附录…………37
致谢…………41