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基于明胶微冰胶的注射型三维细胞支架对人间充质干细胞培养的实验研究，毕业论文，共48页，20960字，附任务书、开题报告、外文翻译、答辩文稿等。
摘要：
皮肤组织工程是一门新兴的边缘学科，它利用生物学和工程学原理研究，构建出用于修复和再生损伤组织功能的替代物。细胞治疗是利用成体功能细胞或干细胞对组织、器官进行修复的治疗方法，也是皮肤组织工程中的一种新手段。目前针对创伤修复的基于细胞治疗的组织工程方法存在着细胞存活率低、细胞游离扩散（无法定点治疗）、手术创伤等问题。因此，亟需一种可注射型、高强机械性、多孔连通的三维细胞载体用于皮肤创伤修复。
本毕业设计基于明胶微冰胶的注射型多孔连通三维支架具有较强的吸附膨胀能力，可自主将细胞及其微环境的各组分吸附于多孔空间内部，为细胞的粘附与增殖提供了良好的生存环境，同时在细胞的移植传输的过程中起到了保护和定点治疗的作用。本实验通过在传统二维平板和三维明胶微冰胶支架中培养人间充质干细胞（hMSCs），来比较在两种生长环境中细胞的存活、增殖情况，以及干性基因和某些皮肤损伤修复相关的生长因子基因的表达。本实验验证了三维明胶微冰胶支架不仅具有良好的生物相容性，也能促进hMSCs干性基因表达和生长因子的分泌。该课题对于探索三维培养环境对于干细胞功能的影响，并创造更实用高效的皮肤组织工程产品具有广阔的发展前景和应用价值。
关键词：皮肤损伤修复，细胞治疗，明胶微冰胶，干性基因，生长因子

目 录
1 绪论 1
1.1 课题背景及目的 1
1.1.1. 组织工程 1
1.1.2. 皮肤组织工程 2
1.1.3. 细胞治疗 3
1.1.4. 三维细胞培养 4
1.1.5. 实验目的 5
1.2 国内外研究现状 6
1.2.1. 皮肤组织工程的研究 6
1.2.2. 细胞治疗的发展状况 8
1.3 本课题研究系统 11
1.4 论文构成及研究内容 13
2 实验材料和实验仪器 14
2.1 实验试剂与耗材 14
2.1.1 明胶微冰胶的制备 14
2.1.2 原代细胞及细胞系 14
2.1.3 原代hASC分离及细胞培养试剂与耗材 14
2.1.4 细胞死活染色及活性检测 14
2.1.5 RNA提取，cDNA合成及real-time PCR试剂与耗材 15
2.1.6 酶联免疫吸附 15
2.2 主要仪器 15
3 实验方法及步骤 17
3.1 可注射明胶微冰胶的制备 17
3.2 脂肪来源间充质干细胞（Adipose-derived hMSCs）的分离 18
3.3 hMSCs接种于明胶微冰胶 18
3.4 扫描电子显微镜（SEM）观察 19
3.5 三维细胞形态和细胞活性的测定 19
3.6 实时荧光定量PCR（qRT-PCR） 22
3.7 酶联免疫吸附实验(ELISA) 23
4 实验结果与讨论 25
4.1 明胶微冰胶的形态及其物理性质 25
4.2 细胞在明胶微冰胶中的存活情况 26
4.3 明胶微冰胶材料的细胞装载效率以及生物相容性 27
4.4 实时定量PCR检测干性基因的表达 29
4.5 实时定量PCR检测生长因子基因的表达 31
4.6 酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测生长因子蛋白水平的表达 33
结 论 34
致 谢 35
参考文献 36