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硕士论文-冬枣果实病害的发生及其生物防治研究，共81页，31155字
摘要
冬枣品质优良，果大脆甜，是近年来发展起来的优质晚熟鲜食果品。但冬枣
果实病害发生严重，严重影响生产。2003 年至 2004 年通过对沾化冬枣果实病害
症状连续观察比较，确定冬枣果实病害主要有 3 种症状类型，分别为溃疡型、软
腐型和黑斑型。由果实病斑上分离 Pseudomonas sp.、Erwinia sp.、Alternaria sp.
和 Xanthomonas sp.四种病原物。针刺回接试验表明，四种病原都能导致果实发
病。Pseudomonas sp.、Erwinia sp.、Alternaria sp.和 Xanthomonas sp.复合侵染可
导致溃疡型、软腐型症状，Alternaria sp.主要引起黑斑型症状。
田间调查结果表明：花芽、叶芽、枣股均能分离到病菌。花期后，花朵带离
量明显升高，谢花后 30d 左右，即果实膨大期，幼果带菌率达 20%以上。谢花后
60d,黑斑型症状开始出现，一直延续到采收期，发病盛期为谢花后 60d 至 90d。
黑斑型症状出现后，感病果实中果酸、单宁、可溶性糖均比健康果实中低，呈现
下降趋势；而果胶含量比健康果实中高，呈现上升趋势。
贮藏期果实病害以软腐症状为主，冷藏 60d 后开始发病。对冷藏期果实内多
酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)测定结果表明：果实冷藏 60d 后，PPO
和 PAL 活性波动较大，这与果实采后冷风贮藏条件下软腐型果实病害的大量发
生时期相吻合。通过对细胞壁降解酶活力的测定发现，在初始到发病中期，蛋白
酶、脂肪酶活力下降明显，果胶酶呈现上升趋势，，同时也影响果实其它物质的
变化。
以黑斑型病斑上分离得到的 Alternaria sp.和 Pseudomonas sp、Xanthomonas
sp.为靶标菌株，进行生物筛选。分别于 2003 和 2004 年，连续两年从莱阳、滨
州及周边地区采集土样 78 处，分离单菌落菌株 130 余株，通过对靶标菌株的室
内拮抗活性测定，获得了 9 株对链格孢真菌拮抗性较强的菌株，5 株分别对黄单
孢杆菌和假单孢杆菌具有较强抑制效果的拮抗菌株。通过分别对两种菌株进行发
酵扩增，配制成复合生物制剂，从盛花期开始对田间冬枣果实病害进行小区防治
试验。试验证实，生物杀菌剂处理的防治效果，明显高于化学药剂防治区的效果，
两年的试验结果基本一致。
关键词： 冬枣；果实病害；病原；发生；生物防治
目
录
第一章 文献综述..................1
1 目前冬枣产业状况和存在的问题............1
2 冬枣果实病害研究现状............2
2.1 冬枣果实病害的症状、病原及发生规律..........2
2.1.1 症状...............2
2.1.2 病原...............2
2.1.3. 发生规律..............3
2.2 枣树果实病害发生对果实品质的影响.........3
2.2.1 外观及形态变化..................3
2.2.2 可滴定酸和含糖量的变化..........3
2.2.3 维生素 C 含量的变化..........4
2.3 影响枣树果实病害发生的环境因子.............4
2.3.1 温度..............4
2.3.2 空气湿度..............5
2.4 寄主和病原的相互作用及寄主抗病性.........5
2.4.1 寄主和病原的相互作用...............5
2.4.2 冬枣果实结构抗病性机制..........6
2.4.3 病程相关蛋白活性变化..............6
2.5 生物防治及综合措施在防治果实病害中的应用.........7
第二章 冬枣果实病害的田间调查与病原鉴定..........9
1 材料和方法..............10
1.1 .供试材料................10
1.2 果实病害类型与病原鉴定............10
1.2.1 病果类型及病原菌的分离纯化.........10
1.2.2 .病原菌株的形态和特性测定.............10
1.2.3 .病原菌株的致病性测定.............10
1.2.3.1 接种用菌株的制备.................10
1.2.3.2 接种方法.................11
1.3 冬枣贮藏期发病果实汁液的致病性测定...........11
1.3.1 发病果实汁液的不同处理................11
1.3.2 发病果实汁液的接种................11
1.3.3 发病果实汁液中病原的分离纯化............11
2
结果与分析............12
2.1 冬枣病果类型及其病原菌落................12
2.2 病原菌株的特征............13
2.3 病原菌致病性的测定结果............13
2.4 冬枣果实软腐病病原及致病性研究...........14
2.4.1 处理前后果实汁液病原调查............14
2.4.2 回接后发病病斑数............15
2.4.3 冬枣回接后发病程度................16
3 讨论...................17
第三章 冬枣果实病害的发生规律..........18
1.材料和方法...............18
1.1 冬枣果实病害田间发生规律................18
1.1.1 试验品种与地点.................19
1.1.2 越冬菌源的检测.................19
1.1.3 病原侵染期的确定.............19
1.1.4 病果的发生与发病率.................19
1. 2.1 果实汁液的制备.................19
1.2.2 含酸量的测定..............19
1.2.3 单宁含量的测定...........20
1.2.4 果胶质含量的测定................20
1.2.5 可溶性糖含量的测定............20
1.3.1 蛋白酶的测定.............20
1.3.1.1 标准曲线的制作..............20
1.3.1.2 样品测定..................21
1.3.1.3 计算..................21
1.3.2 脂肪酶的测定.............21
1.3.2.1 试剂..................21
1.3.2.2 操作步骤..................22
1.3.2.3 计算..................22
1.3.3 多聚半乳糖醛酸酶（PG）.........22
1.3.3.1 操作步骤..................22
1.3.3.2 计算..................23
1.4.1 PPO 活性的测定.................23
1.4.1.1 提取液的制备.................23
1.4.1.2 操作步骤.................23
1.4.2 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的测定...........24
1.4.2.1 仪器设备.................24
1.4.2.2 试剂..................24
1.4.2.3 实验步骤.................24
1.5 芳香物质差异...............25
1.5.1 芳香物质的分析方法.................25
1.5.2 所用仪器及规格.................25
2 结果与分析...............26
2.1 冬枣果实田间主要病害黑斑病发生规律确定............26
2.1.1 病原种类的分离及越冬场所的确定.........26
2.1.2 病原侵入期及潜带菌率的确定.........26
2.1.3 病果的发生与发病率.................27
2.1.4 果实黑斑病发生后对果酸含量的影响............28
2.1.5 果实黑斑病发生后对果胶含量的影响............29
2.1.6 果实黑斑病发生后对单宁含量的影响...........29
2.1.7 果实黑斑病发生后对可溶性糖含量的影响............30
2.2 冬枣果实贮藏期主要病害软腐病发生规律的初步研究....30
2.2.1 采后不同时期病程相关蛋白差异性比较........30
2.2.2 不同发病程度果实的细胞壁降解酶活力比较........32
2.2.3 冬枣发病果实和健康果实的芳香物质差异..........33
3 结论与讨论............34
第四章 冬枣果实病害的生物防治............36
1.材料和方法...............36
1.1 供试菌株与培养基...............36
1.2 拮抗菌株的分离与纯化...............37
1.2.1 土壤样本的采集.................37
1.2.2 拮抗菌的分离.............37
1.2.3 拮抗菌的初筛.............37
1.4 拮抗菌的生物测定................37
1.4.1 对峙法生物测定.................37
1.4.2 抑菌圈法进行生物测定............38
1.5 利用液体摇瓶发酵培养................38
1.5.1 发酵液的制备............38
1.5.2 拮抗菌发酵液孢子浓度测定.............38
1.5.3 发酵液的生物测定.............38
1.6 生物防治技术方案的研究............39
1.6.1 生物制剂的配制.................39
1.6.2 生物制剂对病菌的抑制作用.............39
1.6.3 生物制剂对病害的防治效果.............39
2. 结果与分析.............39
2.1 真菌性病原拮抗菌的筛选与生物测定........39
2.1.1 真菌性病原拮抗菌的筛选.........41
2.1.2 拮抗菌对病原菌菌丝生长的抑制作用.............41
2.1.3 拮抗菌发酵物的生物测定.........43
2.2 细菌性病原拮抗菌的筛选与生物测定........43
2.2.1 对 Pseudomonas sp 拮抗菌的筛选与生物测定.........43
2.2.2 对 Xanthomonas sp 拮抗菌的筛选与生物测定.........44
2.3 对发酵液的生物测定............44
2.4 生物制剂对田间冬枣果实病害的防治.......47
2.4.1 生物制剂对主要病原的抑制作用.............47
2.4.2 生物制剂小区试验对冬枣果实病害的防治效果.....48
3 结论与讨论..............50
论文小结..............51
参考文献..............53
附录..............61