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  • 资源类别:论文
  • 资源分类:生物农医
  • 适用专业:植物病理学
  • 适用年级:大学
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资料简介
硕士论文-昆虫细胞BTI-Tn5B1-4及其克隆株的无血清培养和特性的研究,共48页,28237字
摘要
本论文以 Sf-9为对照,对目前国际上广泛应用的 BTI-Tn5B1-4细胞及其克隆株
H5CL-G和 H5CL-F分别进行了无血清驯化和培养,比较了细胞系在无血清培养基
Sf-900Ш和有血清培养基TNM-FH中的细胞形态、生长速率、病毒产量和重组蛋白表达
水平,主要结果如下:
1、在Sf-900Ш中,细胞形态都发生了改变,BTI-Tn5B1-4和H5CL-G的梭形细胞比
例都有不同程度的下降,细胞变的短而粗,圆形细胞比例增加,细胞略变大。H5CL-F
的梭形细胞完全变为圆形细胞,直径为16.65 ±1.36 μm,而在TNM-FH中梭形细胞比例为
94.6%,大小为57.49 ± 1.85 μm×14.15± 2.40 μm,圆形细胞比例为5.4%,直径为15.59±
1.26μm。Sf-9细胞比在TNM-FH培养的略大。
2、细胞在两种培养基的生长曲线测定显示,BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G、H5CL-F和
Sf-9在Sf-900Ш中生长速度快,倍增时间短,群体倍增时间分别为18.5 h、18.8 h、19.0 h
和21.7 h,而在TNM-FH中它们的群体倍增时间分别为21.9 h、21.69 h、21.87 h和25.4 h。
3、用AcMNPV-1A病毒分别对两种培养基中的BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G和H5CL-F细
胞进行侵染。结果表明,细胞系在两种培养基的病毒感染率都在90%以上,多角体产量
两种培养基间无明显差异。细胞系BTI-Tn-5B1-4、H5CL-G和H5CL-F在Sf-900Ш中的多
角体产量大约为Sf-9在TNM-FH的2~3倍。
4、重组蛋白 β-半乳糖苷酶( β-galactosidase)和碱性磷酸酶( secreted alkaline
phosphatase,SEAP)的表达测定,结果表明,两种培养基间的β-半乳糖苷酶表达量在细
胞系BTI-Tn-5B1-4和Sf-9均无明显差异;细胞系H5CL-G和H5CL-F在Sf-900Ш中表达量高
于在TNM-FH的表达量,其中H5CL-F在Sf-900Ш中表达量最高(4.08×104 IU/ml),大约
为它在TNM-FH的表达量的2.55倍。四种细胞系的碱性磷酸酶在Sf-900Ш中的表达量明
显高于在TNM-FH中的表达量,其中BTI-Tn-5B1-4在Sf-900Ш的表达水平最高(3.90
IU/ml),大约为H5CL-G、H5CL-F和Sf-9在TNM-FH表达量的3~5倍。
关键词:昆虫细胞;无血清培养;生长曲线;病毒产量;蛋白表达
目录
中文摘要...........Ⅰ
英文摘要..........Ⅱ
1 前言............1
1.1 昆虫细胞系的建立......1
1.2 昆虫细胞的改良......2
1.3 昆虫细胞培养基.....3
1.4 昆虫细胞培养的应用................9
1.5 立题依据及其目的意义.............12
2.材料与方法..13
2.1 材料......13
2.2 试验方法 .............13
2.2.1 细胞培养基的制备......13
2.2.2 毒源的制备...........………………...14
2.2.3 细胞的传代培养...........15
2.2.4 细胞的无血清培养和驯化...............15
2.2.5 细胞冻存与复苏.........15
2.2.6 细胞形态观察和大小的测量....16
2.2.7 细胞生长曲线的测定...........16
2.2.8 病毒侵染和病毒产量的测定....16
2.2.9 碱性磷酸酶(SEAP)和 β-半乳糖苷酶(β-gal)的表达.........16
3 结果与分析........18
3.1 细胞的无血清培养和驯化....18
3.2 细胞的形态比较..............18
3.3 细胞冻存与复苏...............20
3.4 细胞生长曲线和群体倍增时间的测定.................20
3.5 病毒的侵染和产量.........22
3.6 β-半乳糖苷酶(β-gal)的表达.........24
3.7 碱性磷酸酶(SEAP)的表达...........26
4 讨论.............28
5 结论....31
参考文献.............32
附录...................37
致谢.........38
硕士期间发表的学术论文....39
导师组意见..40
学位论文独创性声明及学位论文版权使用授权书....41
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