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毕业论文-胜利油田开采区土壤微生物群落结构与多样性研究，共101页，32383字
摘要
随着大规模、频繁的石油开发和生产，引起 的一系列水与土壤石油污染问题，
尤其是油田区土壤污染所造成的生态环境破坏，已受到了广泛关注。土壤微生物
群落分布与多样性识别成为油田生态环境的重要研究内容之一。针对胜利油田石
油污染土壤理化特征，利用分子生物学方法，改进得到了一套适合高含油率、高
碱度土壤微生物群落结构与多样性分析的方法，利用该方法对胜利油田不同石油
污染程度、不同空间分布土壤的微生物群落结构与多样性、种属关系进行了研究。
研究结果表明：（1）利用试剂盒提取方法与 FastPrep 相结合的方法能较好的
提取 DNA； 2）耕地的微生物群落的均匀度指数很高，分别为 0.9208 和 0.9277，
菌属分布较均匀，不存在明显的优势菌属；随着石油污染水平的增加，土壤微生
物多样性逐渐升高，多样性指数分别为 0.4992、0.5471、0.7568； 3）同一油井，
距离油井越近的土壤中微生物群落的多样性亦随之增加。胜利油田中微生物群落
结构与多样性的空间分布特征与污染水平的影响基本相一致，在胜利油田区域内
污染水平对微生物群落结构与多样性的影响在主导地位。（4）识别出了胜利油田
石油污染情况下土壤中出现的优势菌属为：Gulosibacter、Halomonas、Petrobacter、
Methylostis、Pseudoalteromonas，五种优势菌属虽然各不相同，但是它们基本都
属于 Proteobacteria 纲。
关键词：PCR-DGGE；石油污染；土壤微生物群落；空间分布；优势菌属

目录
第 1 章
引言 .... 1
1.1 研究背景与意义 ...1
1.2 国内外研究现状与问题识别 2
1.2.1 土壤微生物多样性研究 ..2
1.2.2 石油污染土壤微生物群落结构研究 ....3
1.2.3 土壤微生物群落与结构多样性分析方法 .4
1.2.4 问题识别 8
1.3 研究内容与技术路线 .9
1.3.1 研究内容 9
1.3.2 技术路线 9
第 2 章 土壤微生物群落结构与多样性研究方法 11
2.1 土壤样品采集与处理方法 . 11
2.2 土壤微生物总 DNA提取方法 .. 11
2.2.1 主要试剂与实验设备 .... 11
2.2.2 实验方法与步骤 .. 12
2.2.3 提取结果检验 13
2.3 16Sr DNA的 PCR扩增 .... 15
2.3.1 主要试剂与实验设备 .... 15
2.3.2 PCR引物、反应体系与程序 .... 15
2.4 土壤微生物 16SrDNA片段 DGGE分析 ... 19
2.4.1 主要试剂与仪器设备 .... 19
2.4.2 实验步骤 ... 20
2.5 土壤微生物系统发育树分析 ... 22
2.5.1 主要试剂与仪器设备 .... 22
2.5.2 方法与步骤 .... 23
2.6 小结 23
第 3 章 土壤微生物群落结构与多样性分析 ..25
3.1 土壤污染特征分析 .. 25
3.1.1 采样布点 ... 25
3.1.2 土壤含水率 .... 27
3.1.3 土壤含油率 .... 27
3.2 土壤微生物群落结构与多样性特性分析 .... 30
3.2.1 土壤污染水平与微生物群落结构与多样性的关系分析 .. 31
3.2.2 土壤微生物群落结构与多样性的空间分布特征分析 . 33
3.3 本章小结 .. 36
第 4 章 土壤微生物种属关系分析 ..41
4.1 目标菌属序列获取与优势菌属识别 . 41
4.2 污染程度与微生物种属关系分析 43
4.2.1 同一水平位置不同泳道亮带系统发育树分析 .. 43
4.2.2 土壤污染水平与微生物种属关系分析 ... 43
4.2.3 土壤微生物种属关系的空间分布特征分析 46
第 5 章
结论与建议 49
5.1 结论 49
5.2 建议 49
参考文献 51
插图索引 55
表格索引 57
致 谢 .59
声 明 .错误！未定义书签。
附录 A书面翻译 63
附录 B 测序结果 ...73