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硕士论文-细胞分裂素类生长调节剂对青花菜采后衰老的影响和转PSAG12-IPT基因的研究，共55页，31597字
摘 要
以青花菜栽培品种'绿皇后'和青岛农业大学园艺植物育种研究室选育的优良自交系
2-2 为试材，研究了青花菜采后内源激素变化和外源使用细胞分裂素类植物生长调节剂
对采后小花蕾衰老的影响，探讨了细胞分裂素延缓青花菜采后衰老可能的机理，在此基
础上进行了转 PSAG12
-IPT基因的研究。结果表明：
1 以'绿皇后'青花菜为试材，研究了在 25 ℃条件下细胞分裂素类生长调节剂 KT、6-BA
和 CPPU对延缓青花菜采后衰老的效果。结果表明：3种细胞分裂素生长调节剂处理均
在不 程度上延缓了青花菜花蕾黄化和叶绿素分解，推迟了呼吸和乙烯跃变峰出现的时
间，降低了峰值，并维持了细胞膜稳定性，降低了内源激素 ABA含量。在这 3 种细胞
分裂素类生长调节剂中，以 CPPU 延缓青花菜衰老效果最为明显，其次是 6-BA，KT
效果最弱。在本试验中，3 种细胞分裂素类生长调节剂延缓青花菜采后衰老效果随着处
理的浓度增加而增加，以 40 mg?L CPPU延缓青花菜衰老效果最佳。
2 以选育的青花菜优良自交系2-2为试材，建立了青花菜高效再生体系：7～9 d青花菜
种子苗下胚轴为最佳外植体，以MS+0.1 mg?L IBA+ 2.0 mg?L 6-BA作为诱导愈伤和分
化最佳培养基，培养基中添加1 mg?L AgNO 可减轻外植体褐化；以MS+0.1 mg?L IAA
为生根最佳培养基。优化的遗传转化体系为：取下胚轴外植体在最佳培养基上预培养2 d，
适宜农杆菌浓度OD 600为0.5～0.75，适宜浸染时间为5 min，共培养3 d后进行选择培养。
愈伤组织和芽分化诱导的选择培养基中添加50 mg?L Kan、生根培养基中添加30 mg?L
Kan进行选培养。
3 获得了4个株系11个植株转化的青花菜阳性植株。对获得的抗 Kan 植株进行了PCR检
测，扩增出了700 bp左右的目的 段，初步表明PSAG12
-IPT基因已导入受体基因组。
关键词: PSAG12-IPT基因; 细胞分裂素; 青花菜: 遗传转化; 采后生理

目录
中文摘要 ........ 1
Abstract.......... 2
缩略符号 ........ 3
前言 ..................5
文献综述 ..........6
1细胞分裂素的合成与降解........... 6
1.1细胞分裂素的生物合成................6
1.2细胞分裂素的转运与降解............7
2细胞分裂素与植物衰老的关系...8
2.1细胞分裂素对植物衰老的影响....8
2.1.1 内源细胞分裂素的影响.................8
2.1.2 外源细胞分裂素的影响.................8
2.2 细胞分裂素对延缓衰老的作用机理................9
2.2.1 细胞分裂素与糖代谢.9
2.2.2 细胞分裂素与脂质氧化反应.......10
2.2.3 细胞分裂素与其他激素协同作用...................10
3细胞分裂素生物合成相关酶基因克隆研究进展...............12
3.1细胞分裂素生物合成相关酶基因的克隆......12
3.2IPT 基因在植物基因工程育种中的中的应用研究 ...........13
4青花菜转基因研究概况...............13
4.1青花菜转基因现状..13
4.2影响转化成功的因素..................14
第一章 KT、6-BA和 CPPU对青花菜采后衰老的影响
1材料与方法.............17
1.1材料......17
1.2方法......17
1.2.1 颜色评分.................17
1.2.2 叶绿素含量测定.....18
1.2.3 呼吸速率测定.........18
1.2.4 乙烯 放速率测定.18
1.2.5 内源激素测定.........19
2结果与分析.............21
2.1外观颜色分值和叶绿素含量的变化..............21
2.2呼吸速率变化..........22
2.3乙烯 速率的变化..22
2.4电导率变化..............23
2.5内源激素的变化......23
3讨论.......25
第二章 青花菜再生体系的建立及 PSAG12-IPT 基因研究
1材料与方法.............26
1.1材料......26
1.2方法......26
1.2.1 青花菜再生体系的建立.............26
1.2.2 农杆菌培养.............27
1.2.3 Kan 抗性试验.........27
1.2.4 青花菜遗传转化体系的优化.....27
1.2.5 青花菜 DNA 提取..28
1.2.6 PCR 检测 ................31
2结果与分析.............30
2.1高效再生体系的建立..................30
2.1.1 不同浓度和配比的 6-BA/IBA 对子叶和下胚轴芽分化的影响 ..........30
2.1.2 不同浓度和配比的 6-BA/NAA 对子叶和下胚轴芽分化的影响.........30
2.1.3 不同培养条件对外植体玻璃化的影响.........31
2.1.4 AgNO 3浓度对青花菜再生的影响 ................31
2.1.5 生根培养基筛选.....32
2.2青花菜转 PSAG12-IPT 基因转化体系的优化 ..32
2.2.1 卡那霉素（Kan）对青花菜遗传转化的影响 32
2.2.2 预培养时间的确定...33
2.2.3 适宜菌液浓度的确定...................34
2.2.4 最佳侵染时间的确定...................34
2.3PCR 检测 .................34
3讨论.....36
3.1 再生体系的筛选........36
3.2 遗传转化体系的优化36
参考文献...........38
致谢...................44