您现在正在浏览:首页 > 论文 > 生物农医 > 硕士论文-CpG-DNA对鸡免疫增强作用的研究

免费下载硕士论文-CpG-DNA对鸡免疫增强作用的研究

  • 资源类别:论文
  • 资源分类:生物农医
  • 适用专业:预防兽医学
  • 适用年级:大学
  • 上传用户:bearcatzhang
  • 文件格式:word
  • 文件大小:2.74MB
  • 上传时间:2011-9-6 23:22:46
  • 下载次数:0
  • 浏览次数:14

安全检测:瑞星:安全 诺顿:安全 卡巴:安全

资料简介
硕士论文-CpG-DNA对鸡免疫增强作用的研究,共76页,30458字
摘要
细菌 DNA 具有广谱的免疫刺激作用。在体内可以直接激活 B 淋巴细胞、单核
细胞、巨噬细胞和树突状细胞,诱导 IL-1 和 TNF-α 等多种细胞因子的分泌,此外,
还能间接刺激 NK 细胞、T 淋巴细胞。本研究通过人工合成 16 种序列的 CpG-
DNA,分别与 ND 疫苗合用免疫鸡,通过检测各项免疫指标,筛选出 4 种具有较强
免疫效果的 CpG-DNA 序列,后经在 SPF 鸡上验证并确定免疫效果最强的 3 种序
列,并且对其中 1 种进行体外克隆扩增,探讨采用质粒重组来扩增 CpG-DNA 代替
人工合成的技术路线。
1、人工合成 16 种含有 5’-PurPur-CG-PyrPyr-3’特征序列的 CpG-DNA。
2、将人工合成的 16 种不同 CpG-DNA 序列分别与 ND 疫苗合用,试验设 ND
疫苗组、生理盐水空白对照组,通过对体液免疫指标(ND HI 抗体效价)、细胞免
疫指标(MTT 法测淋巴细胞增殖能力、血细胞计数、酯酶染色法确定 T 淋巴细胞百
分率)以及免疫器官组织学观察的研究,综合评价不同序列 CpG-DNA 的免疫增强
效果,初步筛选出 4 种对鸡免疫增强效果较佳的 CpG-DNA 序列: AACGTT
AACGTT、AACGTC AACGTC、AGCGTC AGCGTC、AGCGCT
AGCGCT。
3、在初步筛选的基础上,利用 SPF 鸡进行免疫学对比试验,将初选的 4 种对
鸡 免 疫 增 强 效 果 较 佳 的 CpG-DNA 序 列 : AACGTT
AACGTT 、 AACGTC
AACGTC、AGCGTC
AGCGTC、AGCGCT
AGCGCT 分别与 ND 疫苗合用免疫
SPF 鸡,通过检测体液免疫指标(ND HI 抗体效价)、细胞免疫指标(MTT 法测淋
巴细胞增殖能力、酯酶染色法确定 T 淋巴细胞百分率)免疫器官组织学等有关免疫
学指标,进一步验证了所选序列的免疫增强作用,并确定 AACGTT
AACGTT、
AACGTC AACGTC、AGCGTC AGCGTC 3 种序列在所选序列中免疫增强效果最
强,其中 AGCGTC AGCGTC 序列对提高体液免疫和细胞免疫效果更佳。
4、人工合成 AGCGTC
AGCGTC 序列及其互补链,并在其两端引入接头,
通过加热退火的方法使两条链配对成 CpG-DNA 单体,与 pMD 18-T 载体连接并转
化大肠杆菌通过蓝白斑筛选阳性质粒,EcoRI、SalI 酶切鉴定重组质粒,并测序。结
果表明 CpG-DNA 成功插入 pMD 18-T 载体。
5、对体外克隆得到的 pMD 18-T-CG 重组子大量培养通过碱裂解法大量提取质
粒,证明采用质粒重组的方法来扩增 CpG 代替人工合成的技术路线是可行的。
关键词:CpG-DNA;免疫佐剂;鸡;增强作用;细胞免疫;体液免疫
目录
前言…………ⅰ
中文摘要………ⅱ
目录…………ⅵ
第一章 文献综述1
1.CpG-DNA 免疫活性的发现……………2
2.CpG-DNA 作用机理…2
3. CpG-DNA 的应用………3
CpG-DNA 作为免疫佐剂的应用…3
CpG-DNA 作为 DNA 疫苗的应用4
CpG-DNA 在哮喘病治疗中的应用4
CpG-DNA 在肿瘤治疗中的作用…4
CpG-DNA 在抗感染中的应用……5
第二章
CpG-DNA 免疫增强序列的初步筛选…6
1.主要试剂、材料和仪器6
1.1 人工合成 CpG-DNA 序列…………6
1.2 NDV 抗原…………6
1.3 试剂6
1.4 仪器6
1.5 试验用鸡和疫苗……6
2. 试验分组和免疫方法……7
3. 实验内容和方法…………7
3.1 测定鸡 ND HI 抗体效价………………7
3.2 鸡淋巴细胞增殖试验7
3.3 α-醋酸萘酯酶染色和血常规细胞计数7
3.4 免疫组织器官样品的制备与观察……7
4. 统计方法7
5.结果与分析8
5 .1 . Cp G -D NA 对 鸡 HI 抗体 效 价 影 响… …… …… …… …… …… 8
5.1.1 结果与分析……8
5.1.2 讨论………………9
5.2. CpG-DNA 对鸡淋巴细胞增殖的影响……………10
5.2.1 结果与分析…10
5.2.2 讨论…………11
5.3. CpG-DNA 对鸡 ANAE +淋巴细胞百分率的影响……12
5.3.1 结果与分析…12
5.3.2 讨论…………13
5.4. CpG-DNA 对鸡白细胞、淋巴细胞总数的影响…………14
5.4.1 结果与分析……14
5 .4 . 1.1 Cp G- D NA 分子免疫佐剂对鸡白细胞总数的影响……14
5.4.1.2 CpG-DNA 分子免疫佐剂对鸡淋巴细胞总数的影响……15
5.5 CpG-DNA 分子免疫佐剂对鸡 ANAE +、ANAE -淋巴细胞数的影响…17
5.5.1 结果与分析17
5.5.1.1 CpG-DNA 对鸡 ANAE +淋巴细胞数的影响……………17
5.5.1.2 CpG-DNA 对鸡 ANAE -淋巴细胞数的影响……………18
5.5.2 讨论………20
5.6 CpG-DNA 对鸡免疫器官组织学的影响……………20
5.6.1 结果……………20
5.6.2 讨论………23
小 结………25
第三章
免疫增强作用最强序列的确定……27
1.主要试剂、材料和仪器………………27
1.1 人工合成 CpG-DNA 序列……………27
1.2 NDV 抗原………27
1.3 试剂……………27
1.4 仪器27
1.5 试验用鸡……………27
2. 试验分组和免疫方法………………27
3. 实验内容和方法…………28
3.1 测定 SPF 鸡 ND HI 抗体效价………28
3.2 鸡淋巴细胞增殖试验28
3.3 α-醋酸萘酯酶染色和细胞计数………28
3.4 免疫组织器官样品的制备与观察……28
4. 统计方法28
5.结果与分析28
5 . 1 . Cp G - D N A 对 S P F 鸡 H I 抗体效价的影响…28
5.1.1 结果与分析……28
5.1.2 讨论…………29
5.2 CpG-DNA 对 SPF 鸡的淋巴细胞增殖的影响……………30
5.2.1 结果与分析…30
5.2.2 讨论…………30
5 . 3 Cp G - DN Ad 对 S P F 鸡 A N A E +淋巴细胞百分率的影响……… 3 1
5.3.1 结果与分析…31
5.3.2 讨论…………31
5.4 CpG-DNA 对 SPF 鸡免疫 器官组织 学的影响 3 3
5.4.1 结果与分析 …33
5.4.2 讨论…………34
小 结……………35
第四章
CpG-DNA 的体外克隆扩增制备………36
1.材料和方法………………36
1.1 主要试剂………………36
1.2 CpG 寡核苷酸( CpG-ODN)的人工合成…………36
1.3 主要仪器………………37
1.4
试剂的配制……37
2. 试验步骤37
2.1 CpG-DNA 的体外克隆扩增……………37
2.1.1 双链 CpG 单体(CpG-DNA)的制备 ………………38
2.1.2 CpG-DNA5’端磷酸化…………38
2.1.3 载体去磷酸化38
2.1.4 外源片段与载体连接…………38
2.1.5 连接产物的转化及阳性克隆的初步筛选………39
2.1.6 质粒的小量提取………………39
2.1.7 重组质粒的酶切鉴定…………39
2.1.8 pMD 18-T-CG 重组载体的序列测定…………39
2.2
质粒的提取…………41
2.2.1 质粒的大量提取………………40
2 .2.2 质粒纯度的鉴定…………… 4 1
3.结果…………41
3.1 pMD 18-T-CG 重组载体的构建…41
3.2 pMD 18-T-CG 重组载体的酶切鉴定………………41
3.3 pMD 18-T-CG 重组载体的序列测定42
3 .4 质 粒 纯度 的鉴 定 …… …… …… 4 2
4.讨论…42

结…………43
结论……………44
致谢……………45
参考文献………46
附录……………52
资料文件预览
共1文件夹,1个文件,文件总大小:4.00MB,压缩后大小:2.74MB
  • 硕士论文-CpG-DNA对鸡免疫增强作用的研究
    • Microsoft Word文档硕士论文-CpG-DNA对鸡免疫增强作用的研究.doc  [4.00MB]
下载地址
资料评论
注意事项
下载FAQ:
Q: 为什么我下载的文件打不开?
A: 本站所有资源如无特殊说明,解压密码都是www.xuehai.net,如果无法解压,请下载最新的WinRAR软件。
Q: 我的学海币不多了,如何获取学海币?
A: 上传优质资源可以获取学海币,详细见学海币规则
Q: 为什么我下载不了,但学海币却被扣了?
A: 由于下载人数众多,下载服务器做了并发的限制。请稍后再试,48小时内多次下载不会重复扣学海币。
下载本文件意味着您已经同意遵守以下协议
1. 文件的所有权益归上传用户所有。
2. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
3. 学海网仅提供交流平台,并不能对任何下载内容负责。
4. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
5. 本站不保证提供的下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
返回顶部