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  • 资源类别:论文
  • 资源分类:生物农医
  • 适用专业:药学
  • 适用年级:大学
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资料简介

毕业论文-单羰基姜黄素衍生物B63对非小细胞肺癌H460细胞的作用及其初步研究,共54页,29281字,附任务书、开题报告、文献综述、开题报告等
课题的内容和任务要求
B63对H460细胞诱导UPR反应的分子机制研究
实验原理:内质网是细胞质中重要的亚细胞器,其功能包括蛋白质合成、对翻译后的蛋白质进行简单修饰、蛋白质折叠以及合成成熟的转膜和分泌性蛋白。在真核细胞中,内质网也是细胞内钙离子的主要储存场所,对细胞应激反应起调节作用。为了维持蛋白折叠的完整和有序状态,ER中存在大量的蛋白质折叠伴侣(ER伴侣)。在钙离子平衡失调、自由基侵袭或药物刺激等情况下,蛋白质被错误折叠并打乱ER的正常功能和秩序,导致大量未折叠蛋白(UP)积聚在ER中,进而激活ERS下游信号蛋白诱导细胞凋亡。蛋白酶介导的细胞内蛋白降解也是调控包括细胞分化、增殖、细胞分裂和凋亡等细胞生理病理过程的重要环节,可能是ERS被激活的上游重要因素。
实验内容:有报道显示姜黄素诱导的细胞凋亡可通过泛素-蛋白酶通路,因此我们将证实姜黄素和B63是否也是通过泛素-蛋白酶信号传递途径作用于H460细胞并激活ERS,姜黄素与B63是否影响了内质网钙离子平衡,这将有助于深入了解B63和姜黄素通过ERS途径的分子机制,具体实验有:
(1)为检测姜黄素和B63对ER钙储存的影响,我们将用Fura-2 AM 试剂盒(Invitrogen Co. USA) 检测细胞内钙离子浓度,同时我们将已构建的过表达钙网织蛋白(calreticulin)质粒转染H460细胞株,观察过表达calreticulin后B63对细胞的影响。
(2) 检测B63是否影响H460细胞的蛋白酶体(proteasomes)活性,利用酶底物法测定B63处理后对细胞内胰岛素样活性,糜蛋白酶样活性以及谷氨酰多肽水解酶样活性的改变。
预期结果:我们预计B63会消耗内质网钙储存,而calreticulin过表达将引起内质网中Ca2+ 上升,从而导致H460细胞对姜黄素和B63诱导的UPR活性和凋亡的敏感性减弱; B63抑制抑制蛋白酶体活性,并通过泛素-蛋白酶通路促进其诱导的ER stress和细胞凋亡。

摘 要:以单羰基姜黄素衍生物B63作为代表,研究其诱导非小细胞肺癌H460细胞发生内质网相关性细胞凋亡的机制,探讨其中CHOP蛋白在诱导内质网相关性细胞凋亡通路中是否发挥关键性的作用,B63抗癌机制的明确也对我们深入了解单羰基姜黄素衍生物不同的作用机制意义重要。
关键词:单羰基姜黄素衍生物;非小细胞肺癌H460细胞;B63抗癌机制

目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………2
外文摘要…………………………………………………………………………………3
引言……………………………………………………………………………………4
1.仪器设备……………………………………………………………………………4
2.材料与方法……………………………………………………………………………4
2.1 细胞培养……………………………………………………………………4
2.2 化合物处理与样品收集…………………………………………………………7
2.3 MTT实验………………………………………………………………………7
2.4 总蛋白质收集与浓度检测………………………………………………………8
2.5 Western blot………………………………………………………………………8
2.6 RNA收集和浓度检测……………………………………………………………8
2.7 逆转录-定量PCR(RT-QPCR) ……………………………………………………8
2.7.1 通过逆转录合成cDNA ……………………………………………………8
2.7.2 定量PCR(QC-PCR) ………………………………………………………8
3.结果与分析……………………………………………………………………8
3.1单羰基姜黄素衍生物B63对H60、H358细胞增殖的影响……………………8
3.2单羰基姜黄素衍生物B63对H60细胞凋亡的影响……………………………10
3.3单羰基姜黄素衍生物B63对H60细胞内质网相关性细胞凋亡信号通路的
影响……………………………………………………………………………13
4.讨论…………………………………………………………………………14
参考文献……………………………………………………………………………42
致谢……………………………………………………………………………………43

二、课题关键问题及难点
1.检测B63对H460细胞是否通过内质网钙消耗来激活UPR诱导凋亡
2.检测B63是否影响H460细胞的蛋白酶体(proteasomes)活性
3.观察B63是否在体外增强顺铂对NSCLC的抗肿瘤作用
4.观察是否激活ER Stress反应是B63协同抗肿瘤作用的关键分子机制
三、完成该课题研究已具备的条件(有关的研究工作基础,仪器设备条件,经费情况)
以单羰基姜黄素衍生物B63作为代表,研究其诱导非小细胞肺癌H460细胞发生内质网相关性细胞凋亡的机制,探讨其中CHOP蛋白在诱导内质网相关性细胞凋亡通路中是否发挥关键性的作用。
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四、研究方案
1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线
1.检测B63对H460细胞是否通过内质网钙消耗来激活UPR诱导凋亡
2.观察B63是否在体外增强顺铂对NSCLC的抗肿瘤作用
3.观察是否激活ER Stress反应是B63协同抗肿瘤作用的关键分子机制

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