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博士论文-甲状旁腺激素样激素（PTHLH）在小鼠卵母细胞成熟及着床前胚胎发育过程中的作用，共83页，42198字
摘要
哺乳动物体细胞核移植的研究已开展了多年，但是体细胞克隆效率仍然很
低，目前普遍认为体细胞核在受体卵母细胞胞质中不完全的重编程导致了体细胞
克隆的低效率。表观遗传学修饰对体细胞克隆胚胎的基因表达与发育命运起着决
定性作用。对体细胞核在受体卵胞质中重编程的研究不仅有利于对体细胞克隆技
术的完善，也有利于进一步阐明正常的胚胎发育过程及基因调节机制。
研究表明应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素 A（trichostatin A，TSA）
处理小鼠体细胞克隆胚胎可以显著提高体细胞克隆的效率，受 TSA 影响的基因
不仅有可能是影响体细胞克隆胚胎发育的重要基因也有可能在正常的胚胎发育
过程中发挥着重要的作用。本研究建立在小鼠着床前胚胎基因芯片分析的基础
上，通过分析比较小鼠经 TSA 处理的体细胞克隆胚胎、未经 TSA 处理的体细胞
克隆胚胎以及正常受精胚胎的 2-细胞期基因表达谱，筛选出 6 个在经 TSA 处理
的体细胞克隆胚胎和正常受精胚胎中均比在未经 TSA 处理的体细胞克隆胚胎中
表达高的基因，包括 C2cd4b、Cd164l2、Pthlh、Ogdh、Abcd3、Jam3。通过将双
链 RNA（double-stranded RNA，dsRNA）注射到小鼠 1-细胞期胚胎中进行 RNA
干扰来研究这些基因在小鼠着床前胚胎发育中的作用。研究结果显示 6 种基因的
dsRNA 均可有效地降低小鼠胚胎中目的基因的表达，但是只有 Pthlh 表达水平的
降低对囊胚形成有显著影响。
PTHLH 在调节细胞生长、分化、迁移和凋亡上起重要作用。在发现 PTHLH
对小鼠囊胚的形成有显著影响后，进一步对 PTHLH 在卵母细胞和着床前胚胎发
育过程中的表达和作用进行了深入研究。研究结果揭示 Pthlh 在卵母细胞和各发
育阶段的着床前胚胎中均表达，在 MII 期卵母细胞中表达量最高，从 2-细胞期
开始表达水平降低，在囊胚中的表达量最低。研究结果还表明，通过 RNA 干扰
降低 GV 期卵母细胞 Pthlh 表达水平对小鼠卵母细胞成熟没有影响；通过 RNA
干扰降低 MII 期卵母细胞 Pthlh 水平导致经胞质内单精注射（intracytoplasmic
sperm injection，ICSI）构建的显微授精胚胎的囊胚发育率降低；1-细胞期胚胎中
Pthlh 表达水平的下调也导致囊胚发育率降低，Pthlh 表达水平的下调降低了胚
胎中多能性基因 Oct4 和 Nanog 的表达水平和蛋白水平，也改变了胚胎的组蛋白
乙酰化模式。这些结果证明 Pthlh 表达水平的降低能影响小鼠早期胚胎的发育，
表明 PTHLH 在小鼠着床前胚胎发育过程中发挥着重要的作用。本项研究首次证
明了内源性 PTHLH 在小鼠着床前胚胎发育中的作用。
关键词：组蛋白乙酰化酶抑制剂；RNA 干扰；甲状旁腺激素样激素；着床前胚胎

目录
中文摘要……………………………………………………………………………...I
英文摘要……………………………………………………………………………III
第一部分
文献综述………………………………………………………………...1
第一章 组蛋白乙酰化的研究进展………………………………………………...1
第二章 甲状腺激素样激素的研究进展…………………………………………17
第二部分
研究论文……………………………………………………………….30
第一章 C2cd4b、Cd164l2、Pthlh、Ogdh,、Abcd3 和 Jam3 在小鼠着床前胚胎
发育过程中作用的初步探索…………………………………………………….….30
引言.............................................30
材料与方法…………………………………………………………………………..32
结果…………………………………………………………………………………..40
讨论…………………………………………………………………………………..45
参考文献……………………………………………………………………………..47
第二章 甲状旁腺激素样激素在小鼠卵母细胞成熟及着床前期胚胎发育过程中
的作用………………………………………………………………………………..50
引言…………………………………………………………………………………..50
材料与方法…………………………………………………………………………..51
结果…………………………………………………………………………………..57
讨论…………………………………………………………………………………..68
参考文献……………………………………………………………………………..69
结论…………………………………………………………………………………..73
发表论文目录………………………………………………………………………..74
致谢…………………………………………………………………………………..75