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毕业论文-支持细胞作饲养层分离培养小鼠胚胎干细胞，共21页，12642字，附任务书、开题报告、文献综述等
摘要：探索用小鼠睾丸支持细胞作为饲养层分离培养胚胎干细胞的方法，用小鼠睾丸支持细胞作饲养层，大鼠心肌细胞作条件培养液，接种囊胚或桑葚胚培养，挑取并离散内细胞团接种于饲养层，传代培养，观察胚胎干细胞集落的生长状态，并通过碱性磷酸酶染色进行鉴定。结果显示内细胞团在饲养层上生长良好，干细胞呈集落状生长，能传代两次并用碱性磷酸酶染色鉴定结果保持未分化状态。故得出小鼠胚胎干细胞能在小鼠睾丸支持细胞作饲养层、大鼠心肌细胞作条件培养液的条件下分离培养。
关键词：小鼠；睾丸支持细胞；大鼠心肌条件培养液；胚胎干细胞

目录
任务书 .……...………..…….………...……..1
文献综述 …….............…….....….….2
开题报告 .…….……....…. 8
正文 ….………...…....11
摘要……......…..........11
前言.….....………... ..11
材料与方法….………...….……..12
试验结果…...……..…...16
分析与讨论..….……......………..18
结 论...……….……...………...19
参考文献….………...……...…….................19
致 谢…….....………..………...19
指导教师评阅表...…........21
交叉评阅表.………...…......……..…22
答辩记录表……...……..……...………...…….23

论文（设计）的主要内容（技术指标）与要求：
主要内容：
1、大鼠心肌条件培养液的制备
2. 小鼠睾丸支持细胞的培养
3. 获取小鼠胚囊
4. 小鼠胚胎干细胞分离培养
5. 胚胎干细胞传代培养及其鉴定
要求：1、收集相关文献资料，并写出综述报告。
2、根据研究内容，提出课题的研究方案（开题报告）。
3、通过支持细胞作饲养层培养胚胎干细胞，并鉴定干细胞。
4、独立毕业论文的撰写。

文献综述:抑制胚胎干细胞分化的研究进展
摘要：小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESC)是具有自我更新和多向分化能力的胚胎细胞，具有向机体各种组织细胞分化的潜能，故在体外培养胚胎干细胞需要严格的条件，要求ESC既能大量增殖又能保持原有的全能性而不分化，故本文根据文献综述抑制胚胎干细胞在体外培养时分化的多种条件，如饲养层、条件培养基、白血病抑制因子、血清替代物、PD98059等条件。
关键词：小鼠；胚胎干细胞；抑制分化

3.2 研究方法
3.2.1 大鼠心肌条件培养液的制备：取出生当天新生大鼠10只左右，无菌取出心脏，取心室部分，4℃PBS（-）漂洗，剪碎、消化、200目滤网过滤，收集细胞悬液，500 r/min低速离心收集细胞；转移入25cm2培养瓶内，加心肌条件培养液，37℃、5%CO2孵育1h，吸出细胞悬液接种到另一个板，加心肌条件培养液培养；48 h后换液（半量换液）继续培养，72h换液（换成ES细胞培养液）继续培养，培养120h后，收集条件培养液，-20℃保存待用；每天观察心肌细胞的形态和生长状况。
3.2.2 支持细胞的培养：取10只2周龄雄性小鼠，取其睾丸消化，吹打，过滤，接种，37℃、5% CO2培养，观察细胞。当细胞大部分贴壁时，首次换液，培养48h后用20mmol/L的Tris-cl（PH7.2）处理3min，去除残余生殖细胞，以后每72小时换液。
3.2.3 获得囊胚：用常规超排，先打PMSG，48小时后打HCG，然后放公鼠交配，检查母鼠阴道是否有栓塞，如有证明交配成功，隔3.5天取子宫冲囊胚。
3.2.4 胚胎干细胞的培养：将囊胚移入接种饲养层的六孔板中，用ES细胞培养液进行培养，每48h半量换液，37℃、5%CO2培养箱中培养，待内细胞团贴壁生长，5d后挑内细胞团，消化、吹打成小细胞团块，接种于支持细胞饲养层上培养，用ES培养液，37℃、5%CO2培养箱中培养，每48h半量换液。
3.2.5 胚胎干细胞的传代培养：分散的ICM细胞培养3-7 d后，形成的干细胞集落为F1代，将F1代干细胞集落挑出，按照ICM分离法离散F1代干细胞集落，再获得的干细胞集落称为F2代，将F2代干细胞集落挑出,再进行分离传代，并以此方式传代