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资料简介

毕业论文-胎盘生长因子诱导骨髓源单核细胞迁移的机理,共76页,24461字,附外文资料
中文摘要
肿瘤微环境的形成对于肿瘤的生长和迁移起着至关重要的作用。根据文献报
道,肿瘤可以分泌一些细胞、化学因子(如胎盘生长因子)来招募骨髓源单核细
胞到原发瘤处,进而可以促进肿瘤的生长、转移和血管新生。然而,对于胎盘生
长因子(PlGF)招募骨髓源单核细胞的胞内机理却鲜有研究。
本文研究了 PlGF 在此过程中的胞内分子机理,通过免疫荧光和免疫印迹等
多种方法证明了 PlGF 能够激活骨髓源单核细胞内的转录因子 TF,并进一步通过
基因过表达和 RNA 干扰等方法,结合相关细胞实验证明了 TF 在 PlGF 诱导的骨
髓源单核细胞的迁移和贴附过程中起着关键作用。另外,本文深入分析了 PlGF
激活 TF 的胞内分子机理,首次发现 PlGF 能够上调骨髓源单核细胞中的钙离子水
平,并证明 PlGF 激活 TF 的过程首先是通过 PlGF 受体 VEGFR1 介导,然后通过
激活磷酸酯酶 C(PLC)来上调胞内钙离子水平实现的。该研究为更好的了解肿
瘤微环境形成机理以及将来新肿瘤抑制疗法的设计提供了可参考的依据。
关键词:肿瘤微环境;胎盘生长因子;骨髓源单核细胞;细胞迁移;钙离子水平

目录
第 1 章
引 言 ..1
1.1 肿瘤微环境 .......1
1.2 骨髓源单核细胞 ........2
1.3 胎盘生长因子 ...2
1.4 胎盘生长因子诱导骨髓源单核细胞迁移胞内机理的研究 ........3
1.5 本课题主要内容及研究意义 .......4
1.5.1 主要内容 ......4
1.5.2 研究意义 ......4
第 2 章 胎盘生长因子激活下游关键转录因子 TF 5
2.1 前言 5
2.2 实验材料 .5
2.2.1 细胞 ....5
2.2.2 细胞培养基 ..5
2.2.3 主要实验试剂 .......5
2.2.4 实验仪器 ......6
2.3 实验方法 .6
2.3.1 实验前准备 ..6
2.3.2 细胞冻存、复苏和传代 .7
2.3.3 免疫荧光样品制备 8
2.3.4 分核实验步骤 .......9
2.3.5 SDS-PAGE ....9
2.3.6 免疫印迹( Western Blot) ...10
2.4 溶液体系 ........11
2.4.1 细胞培养基 11
2.4.2 免疫荧光相关溶液 .......11
2.4.3 细胞低渗溶液和细胞裂解液 .12
2.4.4 SDS-PAGE 相关溶液 ....12
2.4.5 免疫印迹相关溶液 .......13
2.5 实验结果 ........14
2.5.1 细胞免疫荧光法证明在 RAW264.7 细胞中 PlGF 可以激活 TF ..14
2.5.2 免疫印迹法证明在 RAW264.7 细胞中 PlGF 可以激活 TF .15
2.5.3 在 RAW264.7 细胞中 TF 抑制剂可以削弱 PlGF 对 TF 的激活 ...16
2.6 实验结论 ........17
第 3 章 胎盘生长因子激活 TF 的分子机理探究 .18
3.1 实验原理 ........18
3.1.1 RNA 干扰( RNA interference) .....18
3.1.2 钙离子水平测量 .19
3.2 实验材料 ........20
3.2.1 细胞 ..20
3.2.2 细胞培养基 20
3.2.3 主要实验试剂 .....20
3.2.4 主要实验仪器 .....20
3.3 实验方法 ........21
3.3.1 真核细胞转染 .....21
3.3.2 质粒小量提取 .....21
3.3.3 琼脂糖凝胶电泳 DNA 回收 ..22
3.3.4 大肠杆菌感受态细胞化学转化 ......23
3.3.5 质粒大量提取 .....23
3.3.6 psiRNA-h7SK-GFPZeo 干扰载体构建流程示意 24
3.3.7 psiRNA-TMEM57 质粒设计、构建、提取及转染 .....25
3.3.8 细胞免疫荧光 .....27
3.3.9 胞内钙浓度的测量 .......27
3.4 溶液体系 ........27
3.4.1 分子生物学相关 .27
3.4.2 其他溶液体系 .....28
3.5 实验结果 ........29
3.5.1 成功构建 VEGFR1 的 RNA 干扰质粒 .....29
3.5.2 干扰 VEGFR1 能够抑制 PlGF 对 TF 的激活 ....29
3.5.3 PlGF 能够上调 RAW264.7 细胞中的钙离子水平 ......32
3.5.4 磷酸酯酶 C 抑制剂削弱 RAW264.7 细胞中 PlGF 对 TF 的激活 .34
3.6 实验结论 ........36
第 4 章 TF 在骨髓源单核细胞的迁移和贴附过程的作用 ..37
4.1 实验原理 ........37
4.1.1 迁移实验( Migration Assay) .......37
4.1.2 贴附实验( Adhesion Assay) ........37
4.2 实验材料 ........38
4.2.1 细胞 ..38
4.2.2 实验主要试剂 .....38
4.2.3 实验主要仪器 .....38
4.3 实验方法 ........38
4.3.1 细胞迁移实验 .....38
4.3.2 细胞贴附实验 .....39
4.4 溶液体系 ........39
4.4.1 细胞迁移实验相关 .......39
4.4.2 其他溶液体系 .....39
4.5 实验结果 ........39
4.5.1 过量表达 TF 能够促进 RAW264.7 细胞的迁移 ........39
4.5.2 干扰 TF 表达可以阻断 PlGF 对 RAW264.7 细胞迁移的刺激 .....41
4.5.3 TF 抑制剂能够阻断 PlGF 对 RAW264.7 细胞迁移的刺激 ..43
4.5.4 TF 抑制剂能够削弱 PlGF 对 RAW264.7 细胞贴附的刺激 ..45
4.6 实验结论 ........46
第 5 章 结论与展望 48
5.1 实验结果总结与结论 ........48
5.1.1 试验结果总结 .....48
5.1.2 试验结论 ....48
5.2 未来研究展望 .49
5.2.1 PlGF 诱导骨髓源单核细胞迁移胞内机理的未解之谜 ........49
5.2.2 研究骨髓源细胞招募机理对肿瘤生物学的研究以及肿瘤治疗的意
义 .......50
插图索引 52
参考文献 54
致 谢 ......56
声 明 ...错误!未定义书签。
附录 A 外文资料的调研阅读报告 ......58

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