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硕士论文-温氏附红细胞体体外培养、药物筛选及疾病治疗的试验研究，共84页，41416字
摘要
在RPMI-1640、DMEM、M-199、HL四种培养基中分别添加不同比例的新生
牛血清、葡萄糖和NaHCO3进行牛温氏附红细胞体的体外培养效果的比较，以确
定最佳培养基和新生牛血清、葡萄糖、NaHCO3的添加比例，并依照确定的培养
条件进行温氏附红细胞体体外传代培养和温氏附红细胞体体外感染人、兔、山羊
和猪红细胞的试验研究；利用体外培养确定的条件，进行了咪唑苯脲、磷酸伯氨
喹、盐酸土霉素、四环素等 15 种药物的体外药物杀灭试验，经综合评价从中选
择 2 种体外杀灭效果最好的药物，进行牛温氏附红细胞体病治疗试验，通过治疗
前后临床常规检查、血液涂片镜检、血液生理生化指标测定结果的综合比较，确
定治疗牛温氏附红细胞体病的首选药物。
研究结果表明：RPMI-1640 培养液中添加 30%新生牛血清、2.0%葡萄糖、
0.20%NaHCO3或在HL培养液中添加 20%新生牛血清和 1%HEPES，在 37℃、
5%CO2的条件下进行培养，每 12h更换一次培养液，作原代体外培养，二者均能
够取得较高的感染率，且红细胞表面附红细胞体数量也较多，统计学无显著差异，
但因HL培养基和HEPES价格较高，考虑成本等因素，所以首选RPMI-1640 作为
培养液。
奶牛温氏附红细胞体体外传代培养，当红细胞感染率达 80%以上时则收集该
孔内红细胞，留约 2μl 红细胞泥，并补充 18μl 正常牛红细胞和完全培养液至 200μl
混匀，使其红细胞感染率保持在 7%~9%左右，按原代培养条件进行体外传代培
养，可连续传代 20 代。
人、兔、山羊和猪红细胞在体外培养试验中均能被温氏附红细胞体所感染，
说明奶牛温氏附红细胞体没有严格的特定宿主，并且兔红细胞对牛温氏附红细胞
体有更高的易感性。
通过温氏附红细胞体体外药物杀灭试验证明，咪唑苯脲、磷酸伯氨喹体外杀
灭效果最好，且在有效浓度范围内对红细胞的影响较轻微；敌百虫、依沙吖啶杀
灭效果也很好，但是对红细胞的损伤较咪唑苯脲和磷酸伯氨喹重，因此治疗奶牛
温氏附红细胞体应首选咪唑苯脲或磷酸伯氨喹，其次为敌百虫和依沙吖啶。
在奶牛温氏附红细胞体病的治疗试验中，通过对治疗前后临床症状观察、血
液涂片镜检、奶牛血液的生理生化指标测定，结果表明磷酸伯氨喹治疗效果较咪
唑苯脲好，且对机体的毒副作用低于咪唑苯脲，可首选磷酸伯氨喹治疗牛附红细
胞体病。
关键词：E.wenyoni；体外培养；体外杀灭；治疗
目录
中文摘要.......... 1
英文摘要.......... 2
缩略词表.......... 4
前言....... 1
附红细胞体研究现状 . 2
1 病原学.......... 3
2 流行病学...... 7
3 致病机理...... 8
4 临床症状...... 9
5 剖检特征...... 9
6 诊断方法...... 9
7 防治. 10
研究内容
1 温氏附红细胞体体外培养特性研究.....12
1.1 材料与方法 ...12
1.1.1 材料 .......12
1.1.2 试验动物 ...12
1.1.3 试剂与药品 .12
1.1.4 试验仪器 ...13
1.1.5 所用溶液及其配制 ......13
1.1.6 试验方法 ...14
1.1.7 数据处理 ...16
1.2 结果与分析 ........ 16
1.2.1 不同抗凝剂对温氏附红细胞体体外培养的影响 ....16
1.2.2 不同培养液对温氏附红细胞体体外培养的影响 ....17
1.2.3 不同比例血清对温氏附红细胞体体外培养的影响 ...18
1.2.4 不同比例葡萄糖对温氏附红细胞体体外培养的影响 .19
1.2.5 不同比例NaHCO3对温氏附红细胞体体外培养的影响20
1.2.6 温氏附红细胞体体外感染人、兔、山羊和猪红细胞试验结果 ....21
1.2.7 温氏附红细胞体体外传代培养结果 ....22
1.3 讨论....... 22
1.4 小结....... 24
温氏附红细胞体体外药物杀灭试验....25
材料和方法： ......... 25
2.1.1 材料.... 25
2.1.2 药品与试剂 ... 25
2.1.3 主要仪器 ....... 26
2.1.4 药品的配制 ... 26
2.1.5 试验方法 ....... 27
2.1.6 数据处理 ....... 27
2.2结果与分析 .. 28
2.2.1 咪唑苯脲对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .......28
2.2.2延胡索酸泰妙菌素对温氏附红细胞体体外杀灭效果 ..........29
2.2.3 敌百虫对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .........30
2.2.4磷酸伯氨喹对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .....31
2.2.5 依沙吖啶体对温氏附红细胞体外杀灭效果 ....... 32
2.2.6四环素对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .........33
2.2.7 盐酸多西环素对温氏附红细胞体体外杀灭效果 ...34
2.2.8氟苯尼考注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .35
2.2.9 益伏注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .....36
2.2.10 红弓链克注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .37
2.2.11 血虫霸注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 ...38
2.2.12 福易来注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 ...39
2.2.13 附红特注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 ...40
2.2.14 盐酸土霉素注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 ..........41
2.2.15 附弓链康注射液对温氏附红细胞体体外杀灭效果 .42
2.2.16 空白药物对照组附红细胞体体外培养结果 .......43
2.3 讨论....... 44
2.4 小结....... 44
3温氏附红细胞体病治疗试验.45
3.1 材料和方法 ...... 45
3.1.1试验动物 ..45
3.1.2 药品与试剂 45
3.1.3 主要仪器 ..45
试验方法 ..45
数据处理 ..46
3.2 结果与分析 ......... 46
3.2.1临床症状观察结果 .....46
3.2.2 血液涂片检查结果 .....51
血液生理指标测定结果 .52
血液生化指标测定结果 .56
3.3 讨论....... 59
3.4 小结....... 59
结论........ 60
参考文献........ 61
附录........ 65
致谢........ 68
攻读硕士论文期间发表的学术论文 ........ 69