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资料简介
硕士论文-酶法提取猪骨胶原的研究,共64页,41482字
摘要
以猪骨为原料,用蛋白酶的酶解反应代替传统制胶工艺中的浸灰过程,对骨胶原的
酶解反应与酶法制胶工艺进行了试验研究,以期找出酶法制取高质量骨胶原的合适条
件,并为酶法制胶工艺的工业化提供参考数据。
比较碱法和丙酮法对预处理后的骨料的脱脂效果发现,丙酮法的脱脂率为 98.85%,
碱法的脱脂率为 96.83%。四种酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)的酶
解反应制胶效果,以胃蛋白酶对骨胶原的提取率最高(46.14%),其它依次为胰蛋白酶
(43.42%),中性蛋白酶(30.14%)和碱性蛋白酶(21.51%)。
通过单因素和正交试验对胃蛋白酶酶解反应中各主要影响因素进行了优化。试验结
果表明,胃蛋白酶提取的最优条件是,胃蛋白酶的用量为 0.01g/g 干骨,在 pH2.0 下酶
解 48h。盐析的最优条件是,在浓度为 10%(w/v)的 NaCl 溶液中盐析 24h,骨胶原的回
收率为 64.77%。经过上述优化后的提取工艺制得的骨胶原溶液的骨胶原提取率为
49.75%。
将采用优化后提取工艺制得的骨胶原溶液进行SDS-PAGE电泳分析鉴定,结果表明,
电泳图谱中有三条带,分别为α1、α2和β组分,α1肽链分子量约为 130kDa,α2肽链分子
量约为 118kDa,β肽链的分子量约为 200kDa;提取的骨胶原为典型的Ⅰ型胶原蛋白,
而且电泳图谱条带清晰,说明本试验提取的样品纯度较高。
关键词:骨胶原;酶法;胃蛋白酶;提取率
目录
中文摘要……1
英文摘要……2
1 前言………1
1.1 胶原的简介…1
1.1.1 骨的简介…2
1.1.2 骨胶原的研究进展…………3
1.1.3 骨胶原纤维的降解…………4
1.2 胶原的应用及其发展前景……4
1.2.1 胶原的营养作用……………4
1.2.2 胶原在生物与医学领域的应用………………5
1.2.3 胶原在化妆品中的应用……6
1.2.4 胶原在食品中的应用……8
1.3 胶原的提取工艺……………9
1.3.1 酸法……10
1.3.2 碱法……10
1.3.3 盐碱法…11
1.3.4 酸盐法…11
1.3.5 过氧化氢法………………11
1.3.6 酶解法…12
1.3.6.1 酶种类的选择……………13
1.3.6.2 酶解条件的选择…………13
1.4 论文选题的目的和意义……14
2 材料和方法16
2.1 试验材料…16
2.1.1 试验材料16
2.1.2 试验试剂16
2.2 试验仪器…16
2.3 试验方法…17
2.3.1 脱脂……17
2.3.2 浸酸溶胀脱钙条件的筛选17
2.3.3 蛋白酶提取骨胶原合适条件的筛选………17
2.3.3.1 蛋白酶种类的选择………17
2.3.3.2 蛋白酶合适用量的选择…18
2.3.3.3 蛋白酶作用的合适 pH 值选择……………18
2.3.3.4 蛋白酶作用时间的筛选…18
2.3.4 盐析合适的条件…………18
2.3.5 透析……18
2.3.6 柱层析分离纯化…… ……19
2.3.7 冷冻干燥19
2.4 测试方法…19
2.4.1 蛋白含量的测定…………19
2.4.1.1 标准蛋白曲线的绘制……20
2.4.1.2 样品测定20
2.4.2 L-羟脯氨酸含量的测定…20
2.4.2.1 溶液配制21
2.4.2.2 试样前处理………………21
2.4.2.3 标准曲线的绘制…………21
2.4.2.4 试样测定……………22
2.4.3 SDS-PAGE 电泳测定骨胶原的肽链组成…22
2.4.3.1 溶液配制………………22
2.4.3.2 SDS-PAGE 电泳…………22
3 结果………25
3.1 NaOH 溶液和丙酮脱脂效果的比较…………25
3.1.1 NaOH 溶液的脱脂效果……25
3.1.2 丙酮的脱脂效果…………27
3.2 浸酸溶涨脱钙条件的筛选29
3.2.1 骨料浸酸效果的观察……29
3.2.2 浸酸后的骨胶原提取液的测定结果………29
3.3 蛋白酶提取骨胶原合适条件的筛选…………31
3.3.1 蛋白酶合适种类的选择…31
3.3.2 胃蛋白酶的用量对骨胶原提取率的影响…33
3.3.3 胃蛋白酶作用的不同 pH 值对骨胶原提取率的影响…………35
3.3.4 胃蛋白酶作用时间对骨胶原提取率的影响36
3.4 胃蛋白酶提取的最佳工艺条件正交试验…38
3.5 盐析合适条件的筛选………39
3.5.1 NaCl 浓度对胶原回收率的影响……………39
3.5.2 盐析时间对骨胶原回收率的影响…………40
3.6 胃蛋白酶提取工艺的最终优化流程…………42
3.7 SDS-PAGE 电泳测定胶原肽链组成………42
3.8 冷冻干燥…42
4 讨论…………44
5 结论………47
参考文献…48
致谢………51
攻读硕士学位期间发表的学术论文………………52
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