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硕士论文-花生微卫星DNA的分离与多态性研究，共53页，33239字
摘 要
本文首先对微卫星标记的特点及其在花生上的研究现状作简要综述。然后介绍了通
过杂交富集、建库、筛库方法筛选花生的微卫星序列，并对这些序列设计了引物以及利
用这些新分离SSR引物分析花生栽培种的多态性。
首先采用４种限制酶消化、连接、多种生物素标记的混合SSR探针、链亲和素包被
的磁珠杂交捕获的策略建立富集库，从花生基因组中快速分离含有微卫星序列的阳性克
隆。结果表明在筛选的302个白色菌落中，119个克隆含有重复次数4以上的微卫星序列，
非冗余SSR DNA的比例为43.7%，共记166个SSR位点，其中123个（74.1%）有足够长的
侧翼区，可以进行引物设计，另外43个缺乏足够长的侧翼区，无法设计出相应引物。在
获得的微卫星序列中，完全的占87.95%；不完全占5.42%；复合占6.63%。除探针中使用
的TA，CA，GA，AGA，TGA，ACA外，还观察到(CGC)4重复序列。微卫星重复次数
主要集中在4~30次之间(94.2%)。
然后采用12份花生栽培种材料，对通过建库、筛库、杂交富集的策略开发设计出来
123对SSR引物进行评估，并基于品种间简单匹配系数进行聚类分析。研究表明有44对
SSR引物能产生多态性片段，总共获得176条带，其中107条（60.8%）为多态性带。平
均每对引物产生4条带，2.43条为多态性带，多态性条带的比率为11.1%~100%，PIC值为
0.245~0.886，平均为0.677；根据聚类结果显示，在简单匹配系数值为0.85处，根据SSR
带型12个花生品种可分成3个品种群（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）。研究结果表明，新开发的44对SSR
引物在分析花生栽培种DNA多态性方面非常有用。
关键词：花生微卫星分离栽培种多态性
目录
摘要…………….1
英文摘要……….2
前言…………….3
材料与方法…...18
1. 供试材料…..18
2. 试验方法…...18
2.1 花生基因组 DNA 的提取与检测………………18
2.2 花生微卫星 DNA 富集分离…..20
2.3 序列测定与分析……………..23
2.4 微卫星 DNA 的多态性分析…..23
结果与分析…...26
1. 花生微卫星 DNA 的高效分离…26
1.1 花生基因组 DNA 酶切、杂交筛选的结果………26
1.2 插入子长度检测的结果……..26
1.3 阳性克隆测序的结果………..27
2. 花生微卫星 DNA 的特性分析以及引物设计……28
3.花生新开发的 SSR 标记对花生栽培种的多态性..34
3.1 SSR 引物应用评价…………...34
3.2 SSR 分析所揭示出的花生栽培品种在分子水平上的差异……...36
讨论…………...38
结论…………...42
参考文献……...44