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硕士论文-菏泽地区牡丹核心种质的构建，共68页，42688字
摘 要
牡丹（Paeonia suffruticosa）是我国十大传统名花之一，历来是富贵、吉祥的象征。
经过人们长达 2000 年的栽培、选育，目前，牡丹的品种资源已达到千余种。如此丰富
的品种资源给资源保存及新品种选育工作提供了雄厚的物质基础，但同时也带来了巨大
的工作量。核心种质的建立则很好的解决了这个问题。
自 Frankel 提出核心种质概念以来，核心种质作为一种研究种质资源的有效方法越
来越多的得到应用。目前全世界已在不同程度上建立了大田作物、园艺、牧草等作物及
部分观赏植物的核心种质。
牡丹作为中国传统十大名花之首，构建其核心种质非常有价值。菏泽地区牡丹核心
种质的构建，不仅有利于菏泽市、山东省优良品种的保存，更为牡丹新品种的研究人员
选择优良品种进行杂交提供了一条捷径。
本研究以菏泽地区牡丹 340 个品种为研究对象，采用表型性状分析法和分子标记法
两种方法，构建了核心种质。表型性状分析法主要利用了实地调查所得的每个牡丹品种
的 20 个性状，在 5 个指标上比较了 20 种取样策略的优劣，找出了最佳取样策略。分子
标记法则主要利用了 RAPD 技术进行聚类分析，利用 4 个检验指数对 5 个总体取样比例
进行比较，从中选取最佳核心种质。
主要结论如下：
1．据表型数据构建菏泽地区牡丹核心种质的最佳构建方法为：按花型分组，组内
用多样性指数法，类平均聚类取样，总体取样比例为 15%。
2．适用于牡丹的 RAPD 扩增的最佳反应体系为 20uL 反应体系中，Mg2+浓度为
2mmol/L， DNTP 浓度为 0.15mmol/L，引物浓度为 0.2mol/L，TaqDNA 聚合酶 1.5U，DNA
为 20—30 ng。扩增程序为：94℃ 预变性 4min,94℃变性 30s,38℃退火 40s,72℃延伸
1min,45 个循环后，72℃延伸 5min,12℃保存。
3．10 个 S 序列随机引物共扩增出 181 条带，其中 163 条为多态性条带。使用的
10 个随机引物能将初级核心种质的 102 个品种区分开。
4．菏泽地区牡丹核心种质的最佳构建方法为：按花型分组，组内用多样性指数法，
类平均聚类取样，总体取样比例为 30%，构成初级核心种质。对初级核心种质采用分
子标记法进行分析，最佳取样比例为初级核心种质的 50%，即全部资源的 15%。并用最
佳构建方法构建了菏泽地区牡丹核心种质，共 63 个品种。
关键词：菏泽地区;牡丹;核心种质;构建方法
目 录
摘要…………1
Abstract……3
1 前言 5
1.1 牡丹品种研究现状……………6
1.1.1 种质资源研究进展 6
1.1.2 品种分类研究进展……6
1.1. 3 繁殖方法的研究进展 7
1.1.4 生理学研究进展……………7
1.2 核心种质研究进展……………8
1.2.1 核心种质的应用………8
1.2. 2 核心种质的构建…… 9
1.3 本研究的目的和意义…………12
2 用表型性状法初步构建菏泽地区牡丹核心种质…13
2.1 材料与数据…………………13
2.2 研究方法………………13
2.3 结果与分析……………………15
2.3.1 总体取样比例的确定………15
2.3.2 组内取样策略的选择………16
2.3.3 核心种质的初步构建………17
2.4 讨论……19
2.4.1 牡丹性状数据的选择………19
2.4.2 分组方法的研究………………20
2.4.3 总体取样比例的研究…………20
3 用分子标记法构建菏泽地区牡丹核心种质………22
3.1 试验材料22
3.2 试验方法22
3.2.1 样品的采集与处理…………22
3.2.2 基因组 DNA 的提取与纯化…22
3.2.3 DNA 浓度检测………………23
3.2.4 RAPD 反应体系及扩增程序的优化………………24
3.2.5 引物筛选25
3.2.6 RAPD 扩增反应………………25
3.2.7 扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分离…………………25
3.2.8 条带分析与数据处理 ………25
3.2.9 牡丹核心种质的构建 ………25
3.3 结果与分析 …………………26
3.3.1 基因组 DNA 提取结果的检测26
3.3.2 RAPD 反应体系的优化………26
3.3.3 随机引物筛选结果…………29
3.3.4 RAPD 扩增结果……………29
3.3.5 牡丹核心种质的构建………30
3.3.6 核心种质的检验……………31
3.4 讨论……36
3.4.1 基因组 DNA 的提取………36
3.4.2 两种方法构建的核心种质的比较…………………36
3.4.3 菏泽地区牡丹核心种质构建方法的选择…………38
4 结论 39
参考文献…40
附录………43
致谢………58