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资料简介
硕士论文-山东省仔猪腹泻主要病原调查研究,共63页,35844字
摘要
试验主要从山东省 5 个地区的 50 例疑似猪源性致病性大肠杆菌病例中分离出的 48
株猪源性大肠杆菌进行 O 血清型鉴定、耐药性及致病性研究。O 血清型鉴定试验结果表
明:48 株猪源性大肠杆菌分属 14 种血清型,其中,流行的主要血清型为 O139(18.75%)、
O119(16.67%)、O89(12.50%)和 O20(12.50%),共 29 株,占定型菌株的 60.42%。耐药性
试验结果表明:48 株猪源性大肠杆菌对青霉素类抗生素、四环素类抗生素和氯霉素类抗
生素耐药严重,以四环素、卡那霉素、氯霉素、阿莫西林和链霉素最为严重,对头孢菌
素类和氨基糖苷类抗生素敏感,以头孢唑啉、丁胺卡那霉素和菌必治最为敏感,各分离
菌株均有不同程度的多重耐药性。致病性试验结果表明:48 株猪源性大肠杆菌对小白鼠
具有致病性。
根据 Genbank 中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的基因组
序列,结合两种病毒基因组结构特点,在对两种病毒基因序列进行同源性比较的基础上,
选择二者的 S 蛋白基因为引物设计区,根据 PCR 引物设计原则,应用 Primer5.0 软件设
计出 TGEV 和 PEDV 各两条引物。其中,TGEV 的引物可扩增出 212bp 的特异片段,PEDV
的引物可扩增出 241bp 的特异片段。试验归纳出 TGEV 和 PEDV 单项 RT-PCR 体系的最
优引物浓度和退火温度为:引物浓度,TGEV0.8-1.0μmol/L,PEDV1.0μmol/L,退火温度,
TCEV54℃,PEDV58℃。对山东省不同地区的 24 例疑似病毒性腹泻病例进行 RT-PCR
技术诊断,结果 TGEV 阳性感染率为 54.17%,PEDV 阳性感染率为 75.00%,TGEV 和
PEDV 混合感染率为 29.17%,基因测序结果表明同源率达 99%以上。
关键词:大肠杆菌;O 血清型;药敏试验;猪传染性胃肠炎病毒(TGEV);猪流行
性腹泻病毒(PEDV)
目录
摘要 .......I
ABSTRACT ....II
英文缩略符号 .............III
文献综述 .....1
1 前言 .......1
2 大肠杆菌分离鉴定、血清型及耐药性分析的研究进展 ........2
2.1 大肠杆菌的分离鉴定......2
2.2 大肠杆菌耐药性分析......4
3 TGEV和PEDV生物学特性及诊断方法研究进展..6
3.1 TGEV生物学特性 .........6
3.2 TGE诊断方法 ............9
3.3 PEDV生物学特性 ........11
3.4 PED诊断方法 ...........13
试验一
大肠杆菌的分离鉴定及研究........15
1 材料与方法 15
1.1 材料 ....15
1.2 方法 ....15
2 结果与分析 19
2.1 大肠杆菌分离鉴定 ......19
2.2 血清型鉴定结果 ........21
2.3 药敏试验 22
2.4 致病性试验结果 ........30
3.讨论 ......30
3.1 猪源性大肠杆菌发病率分析.............30
3.2 猪源性大肠杆菌血清型分析.............31
3.3 猪源性大肠杆菌耐药性分析.............31
3.4 致病性试验分析 ........32
3.5 控制大肠杆菌耐药性的策略.............32
试验二
病毒分离鉴定.....33
1 材料与方法 33
1.1 材料 ....33
1.2 方法 ....34
2 结果与分析 39
2.1 参考毒株培养结果 ......39
2.2 TGEV和PEDV的S蛋白基因引物设计结果....39
2.3 参考毒株毒价检测结果...39
2.4 PCR鉴定结果 ...........40
2.5 测序结果 41
3 讨论 ......43
3.1 关于TGEV和PEDV的检测 ..43
3.2 关于TGEV和PEDV的引物设计.............43
3.3 关于RNA酶的控制问题....44
3.4 关于TGEV和PEDV的预防问题.............44
结论 ......45
参考文献 ....46
致谢 ......53
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