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硕士论文-耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因地高辛标记核酸探针的制备及应用，共53页，28500字
摘 要
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）是引起医院感染的一种主要病原菌，严重危害人类健
康。尽管医学研究领域已对 MRS 进行了大量的研究，但目前 MRS 尚未引起兽医工作者
的重视。mecA 基因作为 MRS 的分子标志，在葡萄球菌属中广泛分布，目前在葡萄球菌
属以外的细菌中尚未检出，因此 CLSI 将检测 mecA 基因作为鉴定 MRS 的金标准。
为了解 MRS 在畜禽间的存在情况，本试验从畜禽体表及体内分离葡萄球菌，筛选
出 MRS，对其进行药敏试验，以了解其耐药性，为兽医临床合理用药提供参考。同时，
建立了针对 mecA 基因片段的 PCR 和核酸探针方法，并分别对葡萄球菌分离株进行检测，
以明确耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽中的携带情况。
本研究从鸡、猪、兔、犬的体表及体内分离出 75 株葡萄球菌，通过生化编码鉴定
系统鉴定，主要是金黄色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、猪
葡萄球菌。通过头孢西丁纸片扩散法筛选出 40 株 MRS，占葡萄球菌分离株的 53.3%。
药敏试验的结果显示，耐甲氧西林葡萄球菌菌株对万古霉素、头孢唑啉、阿米卡星等少
数几种药物较敏感，有 55.0%以上的 MRS 对青霉素 G、氨苄青霉素、四环素、红霉素、
克林霉素、氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星耐药，未发现万古霉素耐药菌株。
建立了针对 mecA 基因片段的 PCR 检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法。用 PCR 方法
对 75 株葡萄球菌分离株进行检测，检出 42 株 MRS，占 56.0%，该方法与头孢西丁纸片
扩散法的总符合率为 97.3%。
建立了针对 mecA 基因片段的地高辛标记核酸探针方法。用该方法对 75 株葡萄球菌
分离株进行检测，检出 47 株 MRS，占 62.7%，该方法与 PCR 方法的总符合率为 93.3%，
与头孢西丁纸片扩散法的总符合率为 90.7%。
通过本研究证实，在畜禽的体表及体内能够分离到 MRS，且有较高的分离率（经
不同的方法检测为 53.3%~62.7%），动物源性 MRS 耐药严重呈现多重耐药，应该引起兽
医工作者的足够重视。本研究建立了用核酸探针检测 MRS 的方法，可以对大量样本进
行检测，为防止 MRS 在畜禽间流行奠定基础，从公共卫生的角度讲，也为防止 MRS
通过接触或食源等途径从动物传播给人类提供依据。
关键词：耐甲氧西林葡萄球菌；畜禽；mecA 基因；耐药性；核酸探针；PCR
目录
摘要……………Ⅰ
英文摘要………Ⅱ
缩略语表……Ⅳ
第一章 文献综述1
第二章 试验研究………………9
试验一 动物源性耐甲氧西林葡萄球菌的分离、鉴定及耐药性分析9
1 材料与方法 …9
2 结果与分析…11
3 讨论…………14
4 小结…………15
试验二 耐甲氧西林葡萄球菌 mecA 的 PCR 检测16
1 材料与方法…16
2 结果与分析…21
3 讨论…………28
4 小结…………28
试验三 耐甲氧西林葡萄球菌 mecA的核酸探针检测………………29
1 材料与方法…29
2 结果与分析…33
3 讨论…………35
4 小结…………36
结论……………37
参考文献………38
致谢……………43
导师组意见……44
学位论文独创性声明……………45