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硕士论文-猪圆环病毒2型山东株遗传演化分析及SD1株感染性分子克隆的构建，共65页，30366字
中文摘要
猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科，是一种小的，无囊膜
的单链负股环状 DNA 病毒。分为无致病性的 PCV1 和有致病性的 PCV2 两个基因型。本研
究克隆了 4 株 PCV2 的全基因组，并测定了其序列，通过系统进化分析表明各分离毒株
在进化上存在地域上的相关性，在此基础上进一步构建了 PCV2 感染性分子克隆。
根据GenBank中发表的猪圆环病毒2型（PCV2）全基因序列，设计一对特异性引物，
用PCR的方法直接从在山东地区采集的血清学检测为阳性的病料中分别扩增出4株PCV2
毒株的全基因组，进行了序列测定，分别命名为SD-3,SD-4, SD-5,SD-6,并将其与课题
组以前分离的两株PCV2（SD-1、SD-2）共6株分离株进行了序列分析，结果表明：该6株
毒株的全基因核苷酸序列除SD-2为1768bp外，其余均为1767bp。应用DNAStar软件分析
表明，分离自山东不同地区的这6株PCV2病毒全序列核苷酸同源性较高，达98.5%～100%；
与20株国内外参考序列的核苷酸同源性为95.1%～99.7%。该6株PCV2山东分离株之间
ORF1、ORF2同源性分别为：97.6%～100%，99.1%～100%；推导氨基酸同源性为：99.1%～
100%，97.0%～100%。说明目前山东省流行的PCV2核苷酸序列高度保守，推导氨基酸序
列同源性也较高。进化树分析显示，SD-5与其他五株病毒遗传关系较远，分属两个不同
的大分支，SD-5与澳大利亚的分离株AY754018共同组成了一个大分支；其他5株与美国、
匈牙利等国分离株同属于一个大的分支，遗传关系较近。推测目前山东地区的流行的
PCV2大部分可能来源于欧洲、北美洲等地区，也有小部分可能来源于澳大利亚等其他地
区。
本研究将 PCV2 SD1 株（GeneBank accession number:DQ346683）全基因克隆至真核
表达载体 pSK 的 SacⅡ位点中，成功构建病毒的感染性分子克隆 pSK-PCV2。采用脂质体
介导法将重组质粒 pSK-PCV2 转染 PK-15 细胞，盲传 6 代，经间接免疫荧光初步鉴定，
成功获得具有感染性的活病毒。
关键词：猪圆环病毒 2 型；山东株；pSK 载体；感染性分子克隆
目录
中 文摘 要 …… ……… …… 1
英 文摘 要 …… ……… …… 2
英 文缩 略词 ……… ……… …… 3
前言 ……… 4
文献综述 … 5
研究报告
试 验 一：山东 PCV2 分 离 株 全 基因 序 列分 析 … …… …… ……… …… 20
1 材料与方法 ……… 20
2 结果 …… 25
3 讨 论 …… 35
试验二：猪圆环病毒 2 型 SD1 株感染性分子克隆的构建 …… 37
1 材料与方法 ……… 37
2 结果 …… 39
3 讨论 …… 41
试验三： PCV2
SD1 株分子克隆感染性的初步鉴定 …… 43
1 材 料与方法 …… 43
2 结果 …… 46
3 讨论 …… 48
结论 ……… 49
参 考文献 50
硕 士 期间 发 表 文 章 … … ……… …… 55
致谢 ……… 56
导师 组意见 ……… 57
学位论文独创性声明 ……… 58